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1.1研究對象
以廈門市6家區(qū)級精防機構(gòu)和38家社區(qū)衛(wèi)生服務中心或鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院為研究對象,共44家,其中6家區(qū)級精神衛(wèi)生防治機構(gòu)為各區(qū)疾病預防控制中心,社區(qū)重性精神疾病管理由25家社區(qū)衛(wèi)生服務中心及13家鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院負責。各社區(qū)服務中心或鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院主要從事的精神衛(wèi)生工作包括對轄區(qū)重性精神疾病患者建檔管理與隨訪、病情分類干預、健康體檢;患者家庭健康教育及護理指導、居民心理衛(wèi)生知識健康教育、精神疾病患者雙向轉(zhuǎn)診、應急醫(yī)療處置等。
1.2研究方法
采用自編《社區(qū)精神衛(wèi)生工作人員人力資源現(xiàn)狀調(diào)查表》,收集區(qū)級精防機構(gòu)及社區(qū)衛(wèi)生服務中心或鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院主要從事社區(qū)精神衛(wèi)生人員的基本情況,包括年齡、性別、專業(yè)、學歷、職稱、從事精神衛(wèi)生工作年限、接受精神衛(wèi)生知識培訓等。
1.3統(tǒng)計分析方法
采用SPSS15.0進行統(tǒng)計分析。計量資料采用(均數(shù)±標準差)形式描述,計數(shù)資料采用頻數(shù)資料進行描述。以P<0.05為具有統(tǒng)計學意義。
2結(jié)果
2.1社區(qū)精神衛(wèi)生工作人員一般情況
截止2013年12月31日,廈門市登記在冊的重性精神疾病患者約8328人,在管重性精神疾病患者約為5763人。35家社區(qū)衛(wèi)生服務中心或鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院均有1名兼職人員,3家社區(qū)衛(wèi)生服務中心有2名兼職人員。平均每個社區(qū)精神衛(wèi)生工作人員約要服務7.51萬人口,服務約122名重性精神疾病患者。廈門市社區(qū)精神衛(wèi)生工作人員基本情況。
2.2社區(qū)精神衛(wèi)生工作人員兼職數(shù)情況
在47名精神衛(wèi)生工作人員中,專職數(shù)為2人(4.26%),兼職數(shù)為2項的有37人(78.72%),3項的6人(12.76%),4項的2人(4.26%)。
2.3社區(qū)精神衛(wèi)生人員接受精神衛(wèi)生知識培訓情況
廈門市精神衛(wèi)生中心每年對從事社區(qū)精神衛(wèi)生工作人員進行2~4次精神衛(wèi)生專業(yè)知識培訓。主要內(nèi)容包括各種精神疾病相關(guān)知識,如病因、癥狀、治療、愈后;重性精神疾病管理規(guī)范、隨訪和溝通技巧培訓;社區(qū)精神衛(wèi)生健康教育和健康指導;提供心理支持與危機干預;以及向精神衛(wèi)生機構(gòu)轉(zhuǎn)介患者等知識。社區(qū)精神衛(wèi)生工作人員培訓的參與率為97.9%(46/47)。
3討論與建議
本研究結(jié)果顯示,廈門市社區(qū)精神衛(wèi)生工作人員中兼職比例達到95.7%,同時負責其他工作;此外,社區(qū)精神衛(wèi)生工作人員學歷總體較高,但專業(yè)以臨床醫(yī)學為主,進一步提示需要給予精神衛(wèi)生工作人員在精神衛(wèi)生防治工作更多的時間,以及優(yōu)化專業(yè)機構(gòu)。這與李麗紅等對深圳市的研究結(jié)果相似。其他地區(qū)經(jīng)驗表明,社區(qū)精神衛(wèi)生工作人員的工作應該由社區(qū)全科醫(yī)生承擔較好,但本研究結(jié)果中47名社區(qū)精神衛(wèi)生工作人員中臨床醫(yī)學專業(yè)僅占68.07%。此外,精神科醫(yī)師、精神科護理人員、心理治療師、社會工作者等專業(yè)人員在大部分社區(qū)衛(wèi)生服務中心或鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院都普遍缺乏。社區(qū)精神衛(wèi)生工作者以中青年為主,平均年齡(35.09±9.3)歲,隊伍雖然年青化能更快理解和把握工作思路,但年齡大的工作人員則有較為豐富的社區(qū)工作經(jīng)驗,在多部門協(xié)調(diào)及工作組織開展方面更有經(jīng)驗,進一步建議各社區(qū)或鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院在精神衛(wèi)生工作中新老工作人員合理搭配,優(yōu)勢互補,將更有利于社區(qū)精神衛(wèi)生工作的開展。本研究中從業(yè)精神衛(wèi)生工作平均年限僅為2.77年,人員隊伍流動性較大,無法保證精神衛(wèi)生工作的順利交接,許多工作被迫停滯不前。由于精神衛(wèi)生工作涉及到患者的個人信息,需保護個人秘密,患者及家屬與社區(qū)精神衛(wèi)生工作人員之間建立長期穩(wěn)定關(guān)系,保持工作人員的穩(wěn)定將有利于社區(qū)精防工作順利推進。由于基層人員的技術(shù)力量薄弱,精神科專業(yè)知識缺乏又無法接受系統(tǒng)培訓,雖然每年他們都會接受相關(guān)的培訓,但是由于人員流行性太大,導致無法順利完成精神衛(wèi)生工作,進一步提示穩(wěn)定專業(yè)人才隊伍,減少人才損失是重中之重。社區(qū)精神衛(wèi)生工作人員流動性大,將在醫(yī)患關(guān)系和業(yè)務能力方面給社區(qū)精神衛(wèi)生工作的持續(xù)發(fā)展帶來負面影響。除此之外,各社區(qū)衛(wèi)生服務中心還存在人員參差不齊,學歷水平低、專業(yè)培養(yǎng)不盡規(guī)則等問題,精神疾病的康復現(xiàn)狀等不容樂觀。因此,我們建議衛(wèi)生行政部門應制定相關(guān)政策,保障社區(qū)精神衛(wèi)生工作者的配備及穩(wěn)定性,促使高素質(zhì)人才愿意到基層從事精神衛(wèi)生工作。對社區(qū)人員積極加強健康教育,提高知曉率,消除社會對精神疾病的偏見和歧視,使社區(qū)居民能正確識別精神疾病的早期表現(xiàn),認識到精神疾病是一種可以預防、可以治療及康復的疾病,這將有利于社區(qū)精神衛(wèi)生工作的開展。大力加強精神衛(wèi)生工作人力資源的培養(yǎng)和開發(fā),有計劃,有針對性地采取多種方式對精神衛(wèi)生從業(yè)人員進行培訓以及開發(fā),積極開展培訓,提高他們對精神疾病的預防、診斷、治療及護理,提升他們的業(yè)務水平和工作能力。
4總結(jié)
王大衛(wèi)是位有獨立人格、獨立精神和獨立思想的作家。作為他的讀者,訪問他的愿望,已儲存在心里許久。2010年8月,中國作協(xié)安排西部地區(qū)和北京地區(qū)20位作家到北戴河創(chuàng)作之家休假,王大衛(wèi)也在其中,讓我有機會近距離、面對面采訪了他。
先從王大衛(wèi)的第二本書《尋找天堂》說起。2001年下半年,當他在云南知道有個叫約瑟夫?洛克的美籍奧地利植物學家、探險家、學者,半個世紀前在云南金沙江、瀾滄江、怒江三江并流區(qū)生活、工作了二十八年,并寫下數(shù)百萬字記述納西族歷史與文化的著作,拍攝了數(shù)千張反映三江及其流域自然生態(tài)、民族風情的圖片并將其推介給全世界時,他被洛克在中國28年艱苦卓絕、篳路藍縷、驚世駭俗的經(jīng)歷、精神感動了。翌年開春后,便沿著洛克當年行走的足跡,自費去了云南三江并流區(qū)。三江及其流域的神奇秀美,與它的險峻蕭森是交織的。在昆明時,云南美術(shù)出版社旅游編輯部主任張曉源,當著王大衛(wèi)的面規(guī)勸他:“你已五十出頭,別再拿生命去跑了,多少人為此耗盡一生積蓄,有的甚至一去就走上了不歸路。”張曉源還不知道,王大衛(wèi)已是一個股骨頭壞死Ⅱ期患者。
王大衛(wèi)的生命沒白“跑”,也沒一去不復返。2003年,中國文聯(lián)出版社以高版稅果斷出版了他“跑”的結(jié)果――《尋找天堂》。王大衛(wèi)說:“為什么要歷盡艱辛歷盡危險去寫洛克,因為他做了中國人、云南人應該去做而沒去做的事;他是值得景仰,值得紀錄的。”
“尋找那些靈魂”
2004年底,王大衛(wèi)不經(jīng)意間在貴陽東山陽明祠翰林茶院看到東人達、東父女譯注的《在未知的中國》,他被書中英國傳教土曠代、純粹的獻身精神,以及他們絕然虔誠,絕然悲壯的生命經(jīng)歷感動了,于是又決定去近百年前英國傳教士生活、工作過的烏蒙山區(qū)采訪、考察。
王大衛(wèi)驚訝的發(fā)現(xiàn),在這片云貴接壤的蒼莽的高寒山區(qū),近百年前竟然是中國西南地區(qū)的“文化圣地”、“苗族最高文化區(qū)”。20世紀上半世紀,柏格理、王樹德、高志華、張道惠等英國傳教士,在以貴州威寧石門(石門坎)為中心的烏蒙山區(qū),創(chuàng)造了數(shù)個文化、教育、體育、醫(yī)療史上的奇跡:首次創(chuàng)制苗文,結(jié)束了苗族無母語文字的歷史;首次創(chuàng)辦烏蒙山區(qū)民族學校;首次在西南苗族、彝族地區(qū)實行男女生同校(比先生1912年提出男女同校早7年);首次實踐雙語(漢語、苗語)教學;首次在西南地區(qū)建設(shè)足球場、游泳池;首次在烏蒙山區(qū)創(chuàng)辦醫(yī)院、孤兒院、麻風病醫(yī)院……
王大衛(wèi)閱讀完《苗族史》、《苗族救星》、《在未知的中國》、《“窄門”前的石門坎》等記述那段歷史的相關(guān)著作和近半尺高的文獻資料后,潸然淚下。他被那段歷史感動和震撼了。
2005年上半年,王大衛(wèi)毅然攜了拐杖,拖著他那條患骨病的右腿,又自費往中水、石門、彝良、昭通等地去了。去烏蒙山區(qū)采訪、考察,與去云南金沙江、瀾滄江、怒江和獨龍江流域采訪、考察一樣,跋山涉水,沐風櫛雨,不僅異常艱苦,而且充滿危險。
2008年,以20世紀上半葉烏蒙山區(qū)建設(shè)和發(fā)展鄉(xiāng)村教育為主線的長篇紀實文學《尋找那些靈魂》,在香港文匯出版社董事總經(jīng)理何梅榮先生支持、策劃下順利出版。《尋找那些靈魂》以生動、感人、精致的筆觸,真實、客觀地記述了20世紀上半葉烏蒙山區(qū)“文化圣地”的繁榮景象。
王大衛(wèi)說,“我是在感動狀態(tài)中寫這部書的;如果是為錢,為版稅,為利益,我早就放棄了。誰不敬畏生命呢?”他在“繾綣石門”中說:“在烏蒙山區(qū)那些日子,我是經(jīng)常在感動狀態(tài)中度過的;感動不僅伴隨著我的行程,而且賦予我力量。”
王大衛(wèi)認為:“敬畏生命的更高意義,抑或說精神意義,就是敬畏人類文明。”
與先后五次去云南三江并流區(qū)一樣,王大衛(wèi)也先后五次去了云貴烏蒙山區(qū),兩次系列行走,行程數(shù)千公里,歷時近兩年。兩次體驗式苦旅,他不僅對滇西北、黔西北地區(qū)的地理、歷史、文化、宗教、自然生態(tài)以及民風民俗做了深入采訪、考察,也對世世代代生活在這兩個地區(qū)的納西族人、傈僳族人、普米族人、怒族人、獨龍族人、彝族人、苗族人的心靈與精神世界做了細致入微的采訪、考察。沒有這些堅韌、備嘗艱辛、殫精畢力的采訪、考察,《天地無極》和《尋找那些靈魂》不會那么地沉甸、斑斕、深厚,也不會那么地富有歷史、文化和審美價值。
從寫作角度說,這是一種十分辛苦、嚴謹,有責任感和擔當精神的寫作態(tài)度。
王大衛(wèi)這兩次遠距離、長時間的行走,盡管付出了巨大代價――嚴重損害了股骨頭,也獲得了巨大收獲――盡管收獲不屬于他個人,鳳凰衛(wèi)視、中央電視臺等多家媒體因感動、震撼于《天地無極》、《尋找那些靈魂》記述的人與歷史,進而對洛克、柏格理等歷史人物半個多世紀前在中國鴻烈煊赫的經(jīng)歷進行宣傳報道,并以影視形態(tài)生動彰顯了他們的精神品質(zhì)和生命意義。北京群學文化影視公司總策劃、總導演黃群學,還以《天地無極》、《尋找那些靈魂》為基礎(chǔ)文本,計劃籌拍兩部電影。
更讓王大衛(wèi)欣慰的是,因為《尋找那些靈魂》,云南都市時報親赴石門捐贈了20臺電腦給當?shù)貙W校;浙江溫州“華福慈善基金會”也千里迢迢赴石門為89名視障兒童捐資做了復明手術(shù);臺灣信望愛公益基金會為石門民族學校923名學生每人捐贈了一套羽絨服,并捐資8000萬元人民幣,在貴州建立了一所公益性質(zhì)的大學――貴州盛華職業(yè)學院……
一部用心血凝聚的作品,不是企望獲獎,不是為了賺錢,而是讓它產(chǎn)生社會效應,這是非同尋常的。這或許就是王大衛(wèi)所言的“精神意義”。
一、高度重視,科學定位
學校圖書館(室)是教育事業(yè)不可或缺的組成部分,是提高學生綜合素質(zhì)和辦學品位的重要載體,也是培養(yǎng)和提高學生自我學習、自我教育、自我發(fā)展能力的重要場所。辦校者必須站在提高素質(zhì)教育、培養(yǎng)全面發(fā)展的人的高度,把握學生精神健康成長的方向,認識中小學圖書館(室)建設(shè)的重要性,按照國家教委頒發(fā)的《中小學圖書館(室)規(guī)程》關(guān)于 “圖書館(室)工作必須貫徹國家的教育方針,利用書刊資料對學生進行政治思想品德、科學文化知識等方面的教育,指導學生課外閱讀,促進學生德、智、體全面發(fā)展”的總要求,科學定位,提高圖書館(室)在學校教育中的地位,提高圖書館(室)圖書的利用率,使之真正成為提高學生綜合素質(zhì)的第二課堂,成為學生精神成長的樂園。
二、優(yōu)化閱覽環(huán)境,增強吸引力
學校圖書館是學校教育的文明窗口。一個良好的讀書閱覽環(huán)境對培養(yǎng)學生的學習興趣有著重大作用。走進圖書室,幽雅的環(huán)境,整齊美觀的書架,色彩和諧的布置,琳瑯滿目的報刊,室內(nèi)窗明幾凈,墻上懸掛著格言警句,這些都讓學生賞心悅目,心中不禁涌起愛書、讀書的欲望與沖動。
三、增強服務意識,傳播科學的閱覽方法
圖書管理員要具有強烈的事業(yè)心,熱愛圖書管理工作,善于根據(jù)學生學習、生活的特點,簡化借閱手續(xù),實施開架式或半開架式借書,延長開放時間。在服務過程中應平等對待小讀者,辦事親和公正。通過日常的借書、還書等服務工作,與學生個別談話,觀察、了解學生的閱讀傾向;根據(jù)借書卡記錄,研究學生的閱讀規(guī)律,了解閱讀需求,分析學生個體與年級群體閱讀興趣的變化過程,因勢利導,分類推薦書目。針對學生在圖書利用差、盲目讀書、不良閱讀習慣方面的問題,及時與語文任課教師交換意見,或設(shè)置專門的讀書閱覽常識課加以引導,教會學生利用圖書館(室)的方法和科學讀書的方法,讓學生知曉閱覽制度,培養(yǎng)其良好的閱讀習慣。
四、正確引導,培養(yǎng)學生的讀書興趣
面對紛繁的媒體時代,要讓學生遠離不良信息的危害,最好的方法就是充分利用學校圖書館豐富的優(yōu)秀讀物吸引學生。首先,教師的引導至關(guān)重要,教師的修養(yǎng)、見識、審美情趣無不體現(xiàn)著言傳身教、為人師范的作用。其次,圖書館管理員應采用多種方式,主動向不同層次的學生介紹圖書,提供新書信息,宣傳優(yōu)秀圖書,幫助學生了解圖書、利用圖書。主要方式有:1.櫥窗宣傳。利用黑板報、櫥窗設(shè)計各種專欄,有針對性地向?qū)W生介紹學校藏書,及時向?qū)W生傳遞圖書信息。2.直接推薦。圖書管理員既面向借閱學生個別推薦,又可聯(lián)系班主任、各科教師,取得他們的協(xié)作和配合,集體推薦,以此來吸引學生的讀書興趣。3.提倡學生利用好時間。如課前、課間、飯后、睡覺之前見縫插針地翻閱書籍,持之以恒,積沙成塔,形成良好的閱讀習慣。4.利用好每周一節(jié)的閱讀課,強化課外閱讀,交流閱讀體會,在交流中使學生真正喜歡上讀書。5.每學期,學校圖書館(室)可根據(jù)借閱情況記載,評比出“優(yōu)秀小讀者”和“優(yōu)秀讀書集體”,樹立榜樣,從而在讀者群體中逐步形成以熱愛閱讀為榮的讀書風氣。
五、開展形式多樣的活動,讓學生愛上讀書
幾年來,學校以“愛國、明禮、誠信、守法”為主軸,堅持舉辦各種讀書活動,如古詩誦讀比賽、中外名著知識問答競賽、美文誦讀比賽、故事演講賽、“圖書漂流”等。以年級或班級為單位,組織學生開展“我最喜愛的一本書”“我最喜愛的一位作家”討論活動。學校創(chuàng)造性地開發(fā)了講座式、沙龍式、交流式、親子對話式、辯論式等多種形式的親子讀書活動,使中小學圖書館(室)真正成為學生學習實踐的基地。
蘇霍姆林斯基曾說:“讓學生變聰明的方法,不是補課,不是增加作業(yè)量,而是閱讀。真正的閱讀能夠吸引學生的理智和心靈,激起他對世界和自己的深思,迫使他認識自己和思考自己的未來,沒有這樣的閱讀,一個人就會受到精神空虛的威脅。”
關(guān)鍵詞:精神病專科醫(yī)院;手衛(wèi)生;院內(nèi)感染;調(diào)查分析
手衛(wèi)生是有效預防和控制疾病傳播的最基本且簡便易行的措施。防止醫(yī)院內(nèi)感染最重要的措施便是嚴格執(zhí)行手衛(wèi)生。較多的研究表明,醫(yī)務工作者雙手的細菌數(shù)量及種類均較其他人群多,而且在平時的診療工作中,直接或者間接傳播疾病的危險性比空氣更加嚴重[1]。由于精神病專科醫(yī)院的特質(zhì)和服務對象的特殊性,使得病房多為封閉式管理,同時空氣流通可能不暢,患者多是長期住院,機體對于外界微生物的抵抗力較差,患者之間發(fā)生交叉感染的幾率較大[2]。但是有學者研究發(fā)現(xiàn),精神病專科醫(yī)院醫(yī)護人員手衛(wèi)生意識較為淡薄,洗手依從性較低,可能為醫(yī)院交叉感染及院內(nèi)感染發(fā)生的潛在因素[3],本研究旨在調(diào)查精神病專科醫(yī)院醫(yī)護人員手衛(wèi)生的知曉率及執(zhí)行情況,制定相應的措施,提高手衛(wèi)生的依從性,現(xiàn)報告如下:
1資料與方法
1.1一般資料 對在我院工作的醫(yī)護人員共138例進行調(diào)查,其中53例醫(yī)生,85例護士。
1.2研究方法
1.2.1手衛(wèi)生知識知曉率調(diào)查 自制有關(guān)手衛(wèi)生知識的問卷進行調(diào)查,問卷內(nèi)容包含手衛(wèi)生的概念、六步洗手法、正確使用消毒劑及衛(wèi)生設(shè)施等。共發(fā)放調(diào)查表138分,有效回收138份。
1.2.2手衛(wèi)生執(zhí)行情況調(diào)查 對于醫(yī)護人員進行隨機抽查、隱蔽式現(xiàn)場觀察等方法進行調(diào)查,評價標準按照國家衛(wèi)生部頒發(fā)的《醫(yī)務人員手衛(wèi)生規(guī)范》進行。觀察和記錄醫(yī)務人員操作時手衛(wèi)生的執(zhí)行情況。
2結(jié)果
2.1醫(yī)生、護士對手衛(wèi)生相關(guān)知識知曉情況比較 由表1可見,醫(yī)務人員對手衛(wèi)生知識認知不足,知曉率最高的為六步洗手法,最低的為手衛(wèi)生設(shè)施相關(guān)知識,護理人員對于手衛(wèi)生的知曉情況遠遠高于醫(yī)生,兩組人群間差異有統(tǒng)計學意義(P
2.2醫(yī)生、護士在重要時刻手衛(wèi)生執(zhí)行情況比較 由表2可見,醫(yī)護人員手衛(wèi)生執(zhí)行最差的時刻為接觸患者前,醫(yī)生和護士手衛(wèi)生總執(zhí)行情況差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),護士在接觸清潔物品或無菌操作前、接觸患者后及接觸患者環(huán)境后等手衛(wèi)生執(zhí)行率顯著高于醫(yī)生群體,差異有統(tǒng)計學意義(P
3討論
醫(yī)院感染指的是患者入院前沒有而入院后獲得的感染,也包括出院后48 h之內(nèi)發(fā)生的感染[4]。有報道顯示,精神病專科醫(yī)院是醫(yī)院感染的高危場所,其醫(yī)院感染發(fā)生率可高達10%。遠遠超過同一時期其他醫(yī)療機構(gòu)的平均水平。手衛(wèi)生作為控制醫(yī)院感染最可靠和最重要的措施,其簡便、可行,能夠有效預防和控制病原體的傳播。有學者研究發(fā)現(xiàn),精神病專科的醫(yī)護人員對于手衛(wèi)生知識的知曉率較低,且在日常t療診療活動中,手衛(wèi)生的執(zhí)行情況不樂觀,缺乏對手衛(wèi)生準則的了解。在調(diào)查中發(fā)現(xiàn)超過70%的醫(yī)護人員認為平時接觸的都是精神病患者,沒有什么傳染病,因此也就淡漠了平日里手衛(wèi)生的重要性[5]。而實際上由于精神病患者的特殊性,使得其行為活動異常、生活自理能力及自我保護能力均有所下降,加之長期應用抗精神藥物,住院周期長,使得機體對外界抵抗力降低,處于半封閉環(huán)境中,活動范圍小,其醫(yī)院感染的幾率大大增加[6]。
本研究結(jié)果顯示:①醫(yī)務人員對手衛(wèi)生知識認知度還有待提高,六步洗手法知曉率最高,手衛(wèi)生設(shè)施相關(guān)知識知曉率最低,護理人員對于手衛(wèi)生的總體知曉情況遠遠高于醫(yī)生,兩組人群間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),護士在接觸清潔物品或無菌操作前、接觸患者后及接觸患者環(huán)境后手衛(wèi)生執(zhí)行率顯著高于醫(yī)生群體,差異有統(tǒng)計學意義(P
綜上,精神病專科醫(yī)院醫(yī)護人員手衛(wèi)生知曉及執(zhí)行情況均有待提高,醫(yī)院應該加強手衛(wèi)生相關(guān)管理及考核,提高醫(yī)護人員手衛(wèi)生的依從性,降低醫(yī)院感染發(fā)生率。
參考文獻:
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1衛(wèi)生經(jīng)濟管理的發(fā)展趨向
醫(yī)療市場的競爭,將迫使醫(yī)院衛(wèi)生經(jīng)濟管理的發(fā)展、由規(guī)模擴充向內(nèi)涵建設(shè)轉(zhuǎn)變、由數(shù)量攀升向效益轉(zhuǎn)變、由偏重經(jīng)濟杠桿調(diào)控向提升醫(yī)院核心競爭力轉(zhuǎn)變、由比較科學的管理方式向集約化、系統(tǒng)化管理轉(zhuǎn)變的趨向。以下從毛收入與經(jīng)濟效益、經(jīng)濟管理與質(zhì)量管理的概念和辨證關(guān)系可以看出,實施“四個”轉(zhuǎn)變的重大意義。
1.1毛收入與經(jīng)濟效益的概念與辨證關(guān)系醫(yī)院把醫(yī)療毛收入作為醫(yī)院經(jīng)濟發(fā)展的目標沒有錯,但把醫(yī)療毛收入作為衡量醫(yī)院發(fā)展快慢和考核獎勵的標準,為了提高毛收入甚至不惜提高成本,則是一種錯誤的觀念。從概念上講毛收入是不計(扣成本的收入,是醫(yī)院經(jīng)濟實力的外在表現(xiàn);經(jīng)濟效益是毛收入減去成本后的余額,是醫(yī)院經(jīng)濟實力的內(nèi)在體現(xiàn)。經(jīng)濟效益與毛收人成正比,與成本成反比,毛收人越高,成本越低其經(jīng)濟效益也。就越好,因此要提高經(jīng)濟效益,既要提高毛收入,又要降低成本。
1.2經(jīng)濟管理與質(zhì)量管理的概念與辨證關(guān)系在現(xiàn)實工作中,往往有人把經(jīng)濟管理與質(zhì)量管理割裂開來,甚至對立起來,這是一種片面的理解。隨著質(zhì)量內(nèi)涵的拓展,費用已經(jīng)成為一個很重要的內(nèi)容,病人要求既要把病治好,花的錢還要少,這就是醫(yī)療質(zhì)量新概念的一個內(nèi)容,達到經(jīng)濟管理促進質(zhì)量管理目的。經(jīng)濟概念進入質(zhì)量內(nèi)涵后,對質(zhì)量管理提出了新的要求,要減少費用,只有提高診療效率、縮短住院日。因此,要提高經(jīng)濟效益,就必須抓好質(zhì)量管理。
2強化衛(wèi)生經(jīng)濟管理的必要性
一是當前我國醫(yī)療衛(wèi)生體制改革不斷深化與發(fā)展的需要。
當前我國醫(yī)療衛(wèi)生體制改革的發(fā)展趨勢降低醫(yī)院藥品、檢查項目利潤空間,實際上也就大幅度降低了醫(yī)院的總體利潤空間,給醫(yī)院的可持續(xù)展帶來了資金困難問題。這就迫使我們必須強化醫(yī)院內(nèi)部衛(wèi)生經(jīng)濟管理,否則就難以適應新的發(fā)展趨勢。
二是“看病難”與“看病貴”是當前社會關(guān)注的熱點和難點問題,政府對衛(wèi)生體制改革的發(fā)展趨勢主要是通過強化對醫(yī)療機構(gòu)管理、降低藥品和醫(yī)療服務價格來解決群眾“看病難”與“看病貴”問題,因此,醫(yī)院必須加強經(jīng)濟管理,降低醫(yī)院運行成本,達到降低醫(yī)療服務價格的目的。三是強化衛(wèi)生經(jīng)濟管理是減少衛(wèi)生資源浪費的需要。作為一所醫(yī)院,人力、財力、物力資源十分有限,但對資源的浪費卻隨時可見。因此,醫(yī)院通過加強內(nèi)部經(jīng)濟管理,減少浪費、降低醫(yī)院運行成本是十分必要的。
3強化衛(wèi)生經(jīng)濟管理應注意的幾個關(guān)系
3.1強化衛(wèi)生經(jīng)濟管理應注意投入與產(chǎn)出的關(guān)系
降低成本增加產(chǎn)出比,不僅需要全院人員人人參與,而且還需根據(jù)市場規(guī)律制訂科學的成本控制約束性文件來實現(xiàn)成本管理,一是要對全院人員特別是科主任、護士長進行衛(wèi)生經(jīng)濟管理知識教育,明確成本與產(chǎn)出的關(guān)系,牢固樹立成本意識;二是要進行管理體制改革,設(shè)立衛(wèi)生經(jīng)濟管理監(jiān)控體系。三是實現(xiàn)計算機標準化、科學化管理,對全院藥品,一次性衛(wèi)生用品及器械流通等實行監(jiān)控,以達到控制成本,增加產(chǎn)出的目的。
3.2強化衛(wèi)生經(jīng)濟管理應注意積累與分配的關(guān)系
積累和分配是相互促進又相互制約的關(guān)系。所謂相互促進,是指積累是分配的基礎(chǔ),有效的合理分配又是創(chuàng)造良好經(jīng)營收益的內(nèi)驅(qū)動力,進而豐富積累。所謂相互制約,是指分配過度,積累減少,醫(yī)療衛(wèi)生服務活動就不能正常運轉(zhuǎn),效益低下,導致無可分配。
如果沒有有效的,比較合理的分配,個人、科室、醫(yī)院三者的積極性發(fā)揮不出來,就不能提高工作積極性和管理效率,營造不了好的產(chǎn)出。因此,處理好積累與分配的關(guān)系,是保障醫(yī)療與衛(wèi)生服務活動正常運行的重要條件,更是加快醫(yī)院建設(shè)與發(fā)展的重要因素。
3.3強化衛(wèi)生經(jīng)濟管理應注意社會效益與經(jīng)濟效益的關(guān)系
醫(yī)療衛(wèi)生單位的社會效益與經(jīng)濟效益之間為相互轉(zhuǎn)化的醫(yī)療關(guān)系。醫(yī)療衛(wèi)生單位提供的服務直接產(chǎn)出社會效益,可從提高勞動生產(chǎn)率和減輕社會負擔兩個方面計算出經(jīng)濟價值,隨著醫(yī)療市場的發(fā)展,醫(yī)療衛(wèi)生單位既要把效益放在首位,又要重視市場經(jīng)濟的壓力,因此,醫(yī)療服務社會效益最大化是醫(yī)院經(jīng)營的最終目標,而這一目標的實現(xiàn)須以經(jīng)濟效益最大化相伴而行,以最終實現(xiàn)社會效益與經(jīng)濟效益的統(tǒng)一。
4強化衛(wèi)生經(jīng)濟管理的主要方法
[關(guān)鍵詞] 精神疾病;暴力行為;因素分析;行為重建;護理
[中圖分類號] R749.3 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721(2014)01(a)-0040-03
精神疾病患者由于受到主觀精神意識支配及外界環(huán)境影響,極易出現(xiàn)沖動行為,引起自殺、自傷、傷人及毀物等不良事件[1],此類患者的精神心理狀況極為特殊,據(jù)文獻報道,約60%住院精神分裂癥患者存在既往暴力行為[2],不僅影響患者治療的依從性,也對醫(yī)務人員造成人身威脅。護士作為與患者接觸最頻繁的醫(yī)務人員,有責任和義務降低其暴力沖動,約束行為,轉(zhuǎn)變其觀念,重建正常及健康的日常行為方式[3]。行為重建的前提條件,需要深刻剖析導致暴力行為的誘發(fā)因素,采取針對性的干預手段,才能起到立竿見影的效果。本文旨在總結(jié)行為方式重建所需的護理方法,現(xiàn)報道如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
選取本院精神科2010年8月~2012年12月收治的88例精神疾病患者,其中男性54例,女性34例;年齡為35~69歲,平均(49.2±1.8)歲;精神分裂癥32例,癲癇伴精神障礙17例,情感性精神障礙39例;文盲19例,小學文化27例,初中文化34例,大學文化8例。所有患者入院當天均經(jīng)2名具有副主任醫(yī)師職稱的醫(yī)務人員聯(lián)合診斷,確診為相應病種,診斷參照《中國精神疾病分類與診斷標準第三版》(CCMD-3)。納入標準:無其他心、肝、腎等重要臟器疾病;無原發(fā)性或繼發(fā)性癡呆;無既往暴力史;對本研究知悉并簽署同意書。
1.2 方法
①個體化健康教育:護士需全面評估患者的人格特征、文化層次及家庭背景,制訂個體化健康教育方案;護士需采取通俗易懂的語言向患者介紹疾病發(fā)生原因、治療方法、預后轉(zhuǎn)歸及注意事項,使其形成一套正確的認知體系;為了強化患者對疾病的認知,護士應鼓勵患者復述有關(guān)知識,通過循序漸進的意識主流化,提高患者治療的依從性及認識到協(xié)助治療的重要性。②行為干預:護士需深入患者的內(nèi)心世界,了解其暴力行為的源頭事件,才能有針對性地實行干預;護士應采取誘導式發(fā)問的方法,鼓勵患者進行情感表達,并傾訴內(nèi)心不快,在此過程中,護士一方面需成為一名傾聽者,仔細聆聽其內(nèi)心實況,給予情感支持及心理安慰,另一方面需全面總結(jié)其傾訴內(nèi)容,初步評估不愉悅事件的源頭,從而展開個體化行為干預;護士需指導患者養(yǎng)成良好的性格,如何控制自身情緒及掌握發(fā)泄憤怒手段,同時還需鼓勵其轉(zhuǎn)移攻擊行為,通過言語表達發(fā)泄不滿,并提高自身的行為負責能力,不輕易傷害自己和他人。③情緒控制:護士應指導患者進行冥想訓練、腹式呼吸訓練及全身肌肉放松訓練以舒緩沖動情感;冥想訓練指在病室中播放輕音樂,患者取平臥位,根據(jù)音樂節(jié)奏的變化調(diào)整思路,仿佛將自己置身于大自然中,感受自然界的一切生物,體會生命可貴,冥想訓練還需保證環(huán)境安靜,護士需根據(jù)音樂節(jié)律變化提供旁白,幫助患者更好地進入冥想空間;腹式呼吸訓練指患者取坐位或臥位,左手置于腹部,右手置于胸部,指導患者用力吸氣,左手體會到腹部上抬至最高處,再指導患者緩慢呼氣,右手體會到胸部上抬至最高處,吸氣與呼氣的時間比為1∶1,呼吸頻率控制為3~5次/min為宜,每次訓練時間為10 min,早晚各1次;全身肌肉放松訓練指患者取平臥位,從面部肌肉開始,依次從頸部、背部、胸部、腹部、雙上肢、雙下肢肌肉收縮舒張,每處肌肉舒縮的時間應控制在1∶1為宜,每次訓練15 min,早晚各1次。④認知干預:對于發(fā)生暴力行為的患者,護士應待其情緒恢復平靜后,詢問其暴力后的心境感受,并鼓勵其寫下自己的想法;對于存在自責心理的患者,護士應幫助其走出內(nèi)心譴責,并指導其轉(zhuǎn)變心理行為,減少心理沖動。
1.3 觀察指標
①患者干預前及干預后第4周末接受簡明精神病評定量表(brief psychiatric rating scale,BPRS)測評,BPRS是一個評定精神病癥狀嚴重程度的量表,共18項,按5類因子進行記分,即0~4分,總分為0~72分,總分反映疾病的嚴重性,總分越高,病情越重。②患者干預前及干預后第4周末接受護士用住院患者觀察量表(nurses′ observation scale for inpatient evaluation,NOSIE)測評,NOSIE主要用于住院的成年精神病患者,本量表為頻度量表,按照具體現(xiàn)象或癥狀的出現(xiàn)頻度,分為0~4分:0分為無,1分為有時是或有時有,2分為較常發(fā)生,3分為經(jīng)常發(fā)生,4分為幾乎總是如此。③記錄患者干預后暴力行為發(fā)生的情況。
1.4 統(tǒng)計學方法
采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析和處理,計量資料以x±s表示,采用t檢驗,計數(shù)資料采用χ2檢驗,以P
2 結(jié)果
2.1 干預前后BPRS相關(guān)指標的比較
患者干預后BPRS相關(guān)指標評分均低于干預前,差異有統(tǒng)計學意義(P
2.2 干預前后NOISE相關(guān)指標的比較
患者干預后NOISE相關(guān)指標激惹、精神表現(xiàn)、遲緩及抑郁評分均低于干預前,差異有統(tǒng)計學意義(P
2.3 干預前后暴力行為發(fā)生率的比較
患者干預前發(fā)生暴力行為63例,暴力行為發(fā)生率為71.6%(63/88);干預后發(fā)生暴力行為14例,暴力行為發(fā)生率為15.9%(14/88),差異有統(tǒng)計學意義(P
3 討論
精神疾病患者發(fā)生暴力行為的概率極高,不僅危害其自身的健康狀況,也對周圍的醫(yī)患人群造成傷害[4]。暴力行為是精神科引起醫(yī)患糾紛的主要因素之一,因此,研究此類特殊人群出現(xiàn)暴力行為的危險因素及相應護理策略,在臨床上具有重要的指導意義。暴力行為雖然具有突發(fā)性、沖動性,但通過系統(tǒng)化調(diào)研,能整合出暴力行為的共性特點,為護理干預提供預見性導向[5]。
暴力行為的誘發(fā)因素如下。①環(huán)境突變:精神病患者自制能力極差,一旦入院面對陌生環(huán)境,原來的生活習慣被打亂,接受強制治療,會使其產(chǎn)生緊張、恐懼及被害心理,因此,患者出于自衛(wèi)考慮,會在醫(yī)務人員毫無防備下展開暴力行為;②自由活動受限:患者入院后,常會被限制自由,由于突然失去與家屬的聯(lián)系,會使其出現(xiàn)絕望感與無助感,從而出現(xiàn)因內(nèi)心不安導致暴力行為的發(fā)生;③異常精神活動支配:多數(shù)精神病患者存在幻聽、幻視及興奮性精神活動[6],這些意識活動會誘發(fā)人格障礙,使其控制能力下降,產(chǎn)生突發(fā)性暴力行為。
臨床上應采取如下應對方法:①盡可能地根據(jù)患者日常生活習慣擺放物品,提高其心理舒適度及滿足感;②在醫(yī)務人員監(jiān)管下,適當?shù)亟o予患者活動空間,合理安排家屬探視時間,提高其安全感;③護士應提高自身的專業(yè)素養(yǎng),掌握異常精神活動出現(xiàn)的前兆,及時匯報醫(yī)生給予干預。
本文通過行為重建的護理方法在一定程度上減少了患者暴力行為的發(fā)生率,研究結(jié)果表明,干預后患者的BPRS、NOISE評分及暴力行為發(fā)生率均低于干預前。個體化健康教育可使患者整體把握自身疾病,形成系統(tǒng)的認知體系,明白配合治療的重要性,樹立護患信任,并為以后護理干預打下堅實的基礎(chǔ)。行為干預主要通過心理交流方式了解患者的心理狀況,明確其負性情緒及暴力行為的溯源事件,并制訂個體化行為干預。護士應規(guī)正患者的行為特征,指導其控制情緒,轉(zhuǎn)移暴力行為,可通過言語發(fā)泄內(nèi)心憤恨,以提高患者的行為責任感[7]。另外,由于精神病患者的情緒通常較為暴躁,如何控制并調(diào)整好情緒顯得極為重要。腹式呼吸訓練可提高患者的氣體交換效率,減輕其肌肉張力,從而達到身心放松的效果。冥想可指導患者回歸內(nèi)心深處,以提高心理舒適度。全身肌肉放松訓練可促進人體兒茶酚胺的合成及釋放,從而出現(xiàn)愉悅感或欣,以緩解沖動行為[8]。
綜上所述,對于精神病患者,在了解暴力因素的基礎(chǔ)上,實施行為方式重建,可減輕其暴力行為,有效保證醫(yī)患安全,值得臨床推廣。
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[關(guān)鍵詞] BP網(wǎng)絡; 旅行社; 人力資源危機; 預警模型; 危機識別
doi : 10 . 3969 / j . issn . 1673 - 0194 . 2014 . 03. 034
[中圖分類號] F272.92 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673 - 0194(2014)03- 0074- 05
人力資源危機在旅行社行業(yè)吸引人才、培養(yǎng)人才、留住人才的各個環(huán)節(jié)都有體現(xiàn),影響旅行社行業(yè)人力資源管理的效果,影響旅行社行業(yè)的穩(wěn)定與發(fā)展。因此,如何對旅行社行業(yè)人力資源危機狀況進行評判,進而采取應對措施,是當前旅行社行業(yè)人力資源管理的一個迫切任務。本文引入人工神經(jīng)網(wǎng)絡中的BP網(wǎng)絡,構(gòu)建河南省旅行社人力資源危機預警模型,以期提早應對危機。
1 BP網(wǎng)絡簡介
BP網(wǎng)絡由一個輸入層、若干隱含層和一個輸出層構(gòu)成,是一種具有3層或者3層以上結(jié)構(gòu)的多層神經(jīng)元網(wǎng)絡,網(wǎng)絡中的神經(jīng)元分層排列,它的左、右各層之間各個神經(jīng)元實現(xiàn)全連接,即左層的每一個神經(jīng)元與右層的每個神經(jīng)元都有連接,而上下層各神經(jīng)元之間無連接。每一層內(nèi)神經(jīng)元的輸出均傳送到下一層,這種傳送由連接權(quán)來達到增強、減弱或抑制的作用,除了輸入層的神經(jīng)元以外,隱含層和輸出層神經(jīng)元的凈輸入是前一層神經(jīng)元輸出的加權(quán)和。每個神經(jīng)元均由它的輸入、活化函數(shù)和閾值來決定它的活化程度。在人工神經(jīng)網(wǎng)絡的實際應用中,80%~90%的模型是采用BP網(wǎng)絡或它的變化形式。BP網(wǎng)絡可以有多層,但前向三層BP網(wǎng)絡最具代表性,應用也最為廣泛。
2 基于BP網(wǎng)絡的河南省旅行社人力資源危機預警模型的構(gòu)建
2.1 構(gòu)建旅行社人力資源危機預警指標體系
人力資源危機預警指標體系由一系列能敏感反映人力資源管理活動狀態(tài)和結(jié)果表現(xiàn)的指標構(gòu)成。筆者通過分析河南省旅行社人力資源危機現(xiàn)狀,遵循靈敏性、科學性、可測度性、相對獨立性、預見性和可比性等原則,篩選出獨立性較強、代表性較強和貢獻性高的最小評價指標體系,本文借助了專家打分的方法,各指標的具體值域范圍見表1。
2.2 建立基于BP網(wǎng)絡的旅行社人力資源危機預警模型
2.2.1 用主成分分析法對模擬數(shù)據(jù)進行預處理
根據(jù)表1,本文共模擬了8組數(shù)據(jù)(見表2),以建立基于BP網(wǎng)絡的河南省旅行社人力資源危機預警模型。
對表2中的極小值指標(如員工隱性流失率等)先取倒數(shù),再利用SPSS統(tǒng)計分析軟件進行主成分分析,所得結(jié)果見表3。
本文共提取出6個公共因子,其特征值的方差貢獻率累積達到了96.044%(通常情況下,累積貢獻率達到85%即可)。本文選擇參數(shù)0.65作為劃分主要、次要指標的載荷系數(shù)臨界值,以滿足下一步研究的要求。最后得到由10項指標構(gòu)成的新的人力資源投資風險預警評價指標體系,如表4所示。
2.2.2 BP網(wǎng)絡模型輸入節(jié)點的選擇
根據(jù) Kolmogorov定理(即映射網(wǎng)絡存在定理),一個三層BP網(wǎng)絡即可在任意希望的精度上實現(xiàn)任意的連續(xù)函數(shù) 。因此,本研究中采用三層BP網(wǎng)絡模型。影響旅行社人力資源危機度的評價因子主要有人才引進率、招聘引進員工勝任度等10個,因此,可確定BP網(wǎng)絡的輸入層節(jié)點數(shù)為10。
本文選擇上述簡化后的10項指標作為BP模型的輸入節(jié)點。由于BP神經(jīng)網(wǎng)絡的隱層一般采用Sigmoid轉(zhuǎn)換函數(shù),為提高訓練速度和靈敏性以及有效避開Sigmoid函數(shù)的飽和區(qū),一般要求輸入數(shù)據(jù)的值在0~1之間。因此,需要對輸入數(shù)據(jù)進行預處理。
進行輸入節(jié)點的輸入時,需要先對原始的模擬數(shù)據(jù)進行歸一化處理,將它們轉(zhuǎn)化為閉區(qū)間[0,1]上的無量綱性指標值。本著盡可能體現(xiàn)被評價對象之間的差異化原則,即使其離差平方和最大的原則,本文采用了極值處理法進行歸一運算:
若Mj = max{xij},mj = min{xij} 則x′ij = ■
式中,xij為原始數(shù)據(jù),x′ij∈[0,1]為歸一化后的無量綱性指標,其歸一化結(jié)果見表5。
2.2.3 BP網(wǎng)絡模型隱層節(jié)點的選擇
對于隱層節(jié)點的選擇是一個非常復雜的問題,因為神經(jīng)網(wǎng)絡巨量并行分布的結(jié)構(gòu)和非線性的動態(tài)特性決定了從理論上得到一個簡單通用的簡潔解析表達式或隱層單元確定公式是十分困難的,甚至是不可能的。隱層節(jié)點數(shù)的選擇與問題的要求和輸入輸出單元的多少都有直接關(guān)系:如果隱節(jié)點數(shù)過少,網(wǎng)絡不強壯,就不能識別以前沒有看到的樣本,容錯性就差,或由于網(wǎng)絡太小可能訓練不出來;但隱節(jié)點太多又會使學習時間過長,誤差也不一定最佳。因此,必定存在一個最佳的隱節(jié)點數(shù),可用公式q = ■ + a作為參考。其中,q為隱含節(jié)點數(shù),m為輸入神經(jīng)元數(shù),n為輸出神經(jīng)元數(shù),a為1 ~ 10之間的常數(shù)。
為使隱節(jié)點數(shù)更合適,本文將根據(jù)網(wǎng)絡的實際輸出與期望輸出矢量的均方誤差大小及訓練步數(shù)的多少來綜合確定,最終隱含節(jié)點選為9,其模型訓練精度最佳,訓練步數(shù)也最少。
2.2.4 BP網(wǎng)絡模型輸出節(jié)點的選擇
從表5中選出對應于新預警評價指標體系的數(shù)據(jù)再次進行主成分分析,步驟同前,所得結(jié)果如表6所示。
本文共提取出4個公共因子,其特征值的方差貢獻率累積達到92.232%。它們共同決定旅行社人力資源危機的狀況。
公因子1上載荷值大于0.65的指標有:招聘引進員工勝任度、培訓與員工需求吻合度、員工對評價制度和使用制度的滿意度,涉及旅行社人力資源危機的多個部分,可稱之為“綜合因子”;公因子2上的載荷值大于0.65的指標有:人力資本投資收益率、病假發(fā)生率,可稱之為“員工發(fā)展與保健因子”;公因子3上的載荷值大于0.65的指標有:員工對激勵機制的滿意度、缺勤率,可稱之為員工“價值取向因子”;公因子4上的載荷值大于0.65的指標主要有:員工離職增長率,主要是對員工流失指標的反映,可稱之為“員工流失因子”。
第一,計算各公因子的得分。由于在查找旅行社人力資源危機風險因素提出對策時,通常只研究各公共因子上的主要載荷指標,而不考慮其他冗余指標。因此,為使警情分析輸出更精確,從而能更準確地分析旅行社人力資源危機風險的內(nèi)容,更有針對性地提出人力資源危機預警對策,本文忽略各公因子內(nèi)部的冗余指標(載荷系數(shù)小于0.65的指標),只根據(jù)主要指標(載荷系數(shù)大于等于0.65的指標)的載荷系數(shù),通過下列算式來計算各公共因子得分:
FP1 = ■
FP2 = ■
FP3 = ■
FP4 = ■ = t34
式中,tij是表中指標Xij均值為0、標準差為1的標準化變量;p為數(shù)組序號,p = 1,2,…,8。?搖
第二,以各公共因子的方差貢獻率占4個因子總方差貢獻率的比重作為權(quán)重進行加權(quán)匯總,得出各數(shù)組的最終因子綜合得分Fp:
Fp = ■
通過綜合因子Fp(見表7)來反映旅行社人力資源危機程度,據(jù)此制定相應的防范策略。BP網(wǎng)絡最后一層的傳輸函數(shù)Purelin使得網(wǎng)絡輸出可以是任意值,因此,本文將旅行社人力資源危機預警層次設(shè)置為4個級別,如表8所示,BP網(wǎng)絡的輸出層節(jié)點數(shù)為4,代表不同的旅行社人力資源危機等級,即安全、基本安全、風險和較大風險,4個等級對應的標準輸出分別為[1000]、[0100]、[0010]、[0001]。
依前分析輸出節(jié)點選擇4個,10組輸出的4個端子的數(shù)值就對應于10組人力資源危機預警指標數(shù)據(jù)所反映的旅行社人力資源危機狀況。
結(jié)合旅行社人力資源危機的表現(xiàn)形式,本文提出了以下人力資源危機等級所對應的標準(見表8)。
Ⅰ級狀態(tài):旅行社人力資源各方面管理良好,沒有明顯危機跡象,處于安全狀態(tài),但仍需注意各方面的情況,防止突發(fā)性危機的出現(xiàn)。
Ⅱ級狀態(tài):旅行社人力資源各方面正常,基本看不出什么問題,不過需要提前采取相應措施以提防潛在危機和突發(fā)性危機的發(fā)生。
Ⅲ級狀態(tài):旅行社人力資源出現(xiàn)危機,會帶來一定的損失,但不明顯,會對旅行社人力資源各方面造成一定負面影響。
Ⅳ級狀態(tài):旅行社人力資源出現(xiàn)嚴重危機,對人力資源各方面造成非常明顯和嚴重的影響,甚至導致旅行社倒閉。
綜上所述,本文建立的BP網(wǎng)絡人力資源危機預警模型的構(gòu)造為:10 × 9 × 4(即10個輸入神經(jīng)元,9個隱層神經(jīng)元,4個輸出神經(jīng)元)。
3 基于BP網(wǎng)絡的旅行社人力資源危機預警模型的訓練和檢測
本文采用MATLAB工程計算軟件的神經(jīng)網(wǎng)絡工具箱設(shè)計、訓練并檢測已建立的BP神經(jīng)網(wǎng)絡預警模型。
3.1 基于BP網(wǎng)絡的旅行社人力資源危機預警模型的訓練
本文將表6歸一化后的前6組指標值作為BP網(wǎng)絡的輸入,由表7確定的風險程度矩陣作為與之相對應的期望輸出,導入MATLAB的圖形用戶界面――GUI(Graphical User Interfaces),即可創(chuàng)建網(wǎng)絡進行訓練。主要訓練參數(shù)設(shè)置如下(未提及的參數(shù)均采用默認值)。
(1) 訓練函數(shù):TRAINLM函數(shù),它適用于中、小規(guī)模網(wǎng)絡的函數(shù)擬合問題,收斂快,收斂誤差小。
(2) 權(quán)值調(diào)節(jié)規(guī)則:LEARNGDM函數(shù),采用動量梯度下降方法對權(quán)值和閾值進行調(diào)整。
(3) 網(wǎng)絡層數(shù):3層。
(4) 性能函數(shù):MSE函數(shù),表示輸出矢量與目標矢量之間的均方誤差。
(5) 期望誤差:ε = 0.001。
由圖1可知,當網(wǎng)絡訓練至第三步時,網(wǎng)絡性能達標。BP網(wǎng)絡模型的訓練輸出見表9,至此,BP網(wǎng)絡模型訓練完畢。
3.2 基于BP網(wǎng)絡的旅行社人力資源危機預警模型的檢測
同理,用第7、第8組歸一化后的指標數(shù)據(jù)及對應的風險程度矩陣作為模型檢測的輸入和期望輸出,檢測結(jié)果見表10。檢測結(jié)果表明,實際輸出與期望輸出十分接近,誤差滿足要求。
由此可以得出結(jié)論,基于BP網(wǎng)絡建立的旅行社人力資源危機預警模型是有效的,可以用這個經(jīng)過訓練、檢測完畢的BP網(wǎng)絡危機預警模型對旅行社人力資源危機進行預警實證研究,以防范人力資源風險,保證旅行社企業(yè)良性運行,同時對整頓治理旅游市場秩序起到監(jiān)督和促進作用。
主要參考文獻
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作者:張惠文,袁小兵,張擁軍,顧學范
【關(guān)鍵詞】 苯丙酮尿癥
【Abstract】 AIM: To gain more insight into the mechanism of neuronal injury in phenylketonuria patients and to investigate the effect of phenylalanine on intracellular free calcium concentration ([Ca]i) of embryonic rat cortical neurons. METHODS: Calcium imaging was used to observe the influence of Lphenylalanine and its derivatives on [Ca]i. RESULTS: High concentration of Lphenylalanine (Phe, 10 mmol/L) and DLβphenyllactic acid (PL,10 mmol/L)decreased [Ca]i, while phenylacetic acid (PAA, 10 mmol/L) decreased, then increased, and again decreased [Ca]i. With the normal extracellular balance solution replaced by calciumfree and natriumfree balance solution, PL did not change its effect on intracellular free calcium. With Thapsigargin (100 nmol/L) added to the normal extracellular solution to inhibit the sarcoplasmic/endoplasmic reticulum Ca2+ATPase(SERCA), PAA decreased [Ca]i, and no subsequent increase of [Ca]i was observed. With the same concentration, PL and PAA had more significant effects on immature neurons. CONCLUSION: Combining the result of gene chips, Lphenylalanine and its derivatives can activate plasma membrane Ca2+ATPase and accelerate the extrusion of intracellular free calcium from neurons, thus resulting in the decrease of [Ca]i.
【Keywords】 phenylketonuria; calcium imaging; phenylalanine
【摘要】 目的: 探討苯丙酮尿癥患者腦損傷的病理生理機制,分析苯丙氨酸和胞質(zhì)游離鈣有無關(guān)系. 方法: 用鈣成像技術(shù)檢測氨基酸及其衍生物對胚鼠皮層未成熟神經(jīng)元胞質(zhì)游離鈣濃度的影響. 結(jié)果: 高濃度苯丙氨酸降低胞質(zhì)游離鈣,苯乙酸使胞質(zhì)內(nèi)鈣濃度降低后升高最后又降低,苯乳酸使胞質(zhì)內(nèi)鈣降低更明顯. 使用無鈣離子無鈉離子的細胞外液,苯乳酸降低胞質(zhì)內(nèi)鈣的作用無明顯影響;使用Thapsigargin阻斷內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上鈣泵,苯乙酸雖仍能降低胞質(zhì)內(nèi)鈣,但沒有降低后又升高的現(xiàn)象. 當苯丙氨酸、苯乙酸和苯乳酸相同濃度時,苯乙酸、苯乳酸較苯丙氨酸的作用更強. 結(jié)論: 結(jié)合我們以前的觀察結(jié)果,苯丙氨酸可能激活plasma membrane Ca2+ATPase,促進神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)鈣外排,進而導致神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)鈣濃度降低.
【關(guān)鍵詞】 苯丙酮尿癥;鈣成像;苯丙氨酸
0引言
苯丙酮尿癥是遺傳代謝性疾病,由于苯丙氨酸羥化酶基因突變導致的酶活性缺失或者降低,苯丙氨酸不能轉(zhuǎn)化為酪氨酸,體內(nèi)苯丙氨酸及其衍生物苯乙酸、苯丙酮酸、苯乳酸等貯積. 苯丙酮尿癥的研究歷史較長,生化研究顯示高濃度的苯丙氨酸抑制Na+, K+ATP酶、肌酐激酶活性,電生理研究顯示高濃度的苯丙氨酸抑制海馬神經(jīng)元N型鈣通道開放,抑制NMDA受體激活,抑制突觸前膜谷氨酸釋放,抑制突觸后谷氨酸能興奮性電位[1,2]. 我科用基因芯片的方法研究了高濃度苯丙氨酸作用下胚鼠皮層未成熟的原代培養(yǎng)神經(jīng)元基因表達譜的變化,著重觀察了基因芯片中鈣離子相關(guān)蛋白,發(fā)現(xiàn)高濃度苯丙氨酸能增加calmodulinⅠ, Ca2+/calmodulindependent protein kinase, brain typeⅡ, L型Ca2+ channel的基因表達,降低calmodulinⅡ, calcineurin, plasma membrane Ca2+ATPase 2b和2a的基因表達[3]. 因此,本實驗擬用鈣成像技術(shù)檢測氨基酸及其衍生物對神經(jīng)元胞質(zhì)游離鈣濃度的影響.
1材料和方法
1.1胚鼠大腦皮層神經(jīng)元原代培養(yǎng)孕14 d SD大鼠,取出胚鼠,分離大腦皮層,剝除皮層外軟腦膜,1.25 g/L胰蛋白酶37℃消化10 min后,滴入胎牛血清終止消化,加入含B27的神經(jīng)細胞培養(yǎng)基(Neurobasal, Gibcol). 用細口徑吸管反復輕吹打,得到細胞懸液,以中等密度接種于0.5 g/L右旋多聚賴氨酸包被的蓋玻片上,蓋玻片預置于35 mm的培養(yǎng)皿中,37℃, 50 mL/L CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~7 d備用.
1.2溶液配制標準細胞外液,無鈉細胞外液,無鈣細胞外液配方見Tab 1. L苯丙氨酸(Lphenylalanine, Phe, Sigma),苯乙酸(phenylacetic acid, PAA, Sigma),苯乳酸(DLβphenyllactic acid, PL, Sigma)用標準細胞外液配成40 mmol/L. Thapsigargin (Sigma)用標準細胞外液配成100 mmol/L貯存液,保存于-20℃.表1各種細胞外液配方(略)
1.3鈣顯影方法觀察苯丙氨酸及其衍生物對神經(jīng)元胞質(zhì)游離鈣的影響Fluo4, AM 和FuraredTM, AM(Molecular Probe Inc.) 配成2 mmol/L的二甲亞砜(Sigma, 純度999 mL/L)溶液,分裝后-20℃避光保存?zhèn)溆? 這兩種染料有相近的激發(fā)光波長(約488 nm)和不同的發(fā)射光波長[Fluo4, (530±15) nm; Furared (640±15) nm]. Fluo4的發(fā)射光強度隨著胞內(nèi)游離鈣離子濃度升高而增加,而Furared的發(fā)射光強度隨著胞內(nèi)游離鈣離子濃度升高而降低. 平鋪于蓋玻片上的細胞在細胞外液中洗一次后,與鈣指示劑Fluo4(終濃度5 μmol/L)和Furared(終濃度5 μmol/L)室溫下孵育30 min,在細胞外液中洗3次后,將細胞置于標本槽中,30 min后共聚焦顯微鏡(LSM 510, Zeiss公司,德國)載物臺上觀察. 上述操作避光進行. 標本槽為自制的方形有機玻璃皿,底部用石蠟與一薄玻片封接. 藥品以不同細胞外液配成2倍終濃度保存,1 wk內(nèi)使用. 標本槽中有0.5 mL細胞外液, 給藥前均記錄5 min對照,然后將0.5 mL的藥物沿槽的邊緣加入.
1.4熒光圖像的記錄和[Ca2+]i的計算熒光圖像由Zeiss激光掃描共聚焦顯微成像系統(tǒng)記錄. 儀器和軟件設(shè)置: 40×/1.3倍油鏡,激發(fā)光波長為488 nm,CH3和CH4分別是針對485和635 nm波長熒光信號的檢測通道. 激光每隔10 s掃描一次細胞,掃描時間1 s,每種藥記錄13 min.
通過Region of Interest測得細胞區(qū)域CH3, CH4通道的熒光強度,計算Fluo3的發(fā)射光強度與Furared的發(fā)射光強度的比值可以反映胞內(nèi)游離鈣的相對濃度,同時可以消除細胞幾何形狀對胞內(nèi)鈣濃度測量的影響.
1.5數(shù)據(jù)處理將每1 min的6張圖像的比值取平均值作為該時間段胞質(zhì)游離鈣濃度(ci),將給藥前5 min記錄的30張圖像熒光強度的均值作為胞質(zhì)游離鈣的基礎(chǔ)值(c0),利用以下公式計算每分鐘胞質(zhì)游離鈣隨時間的變化曲線.
2結(jié)果
2.1苯丙氨酸對神經(jīng)元胞質(zhì)游離鈣的影響由于神經(jīng)元在靜息狀態(tài)下胞質(zhì)游離鈣有自發(fā)性的波動,當胞質(zhì)內(nèi)鈣在基礎(chǔ)值上下10%變化時我們不認為是藥物的作用. 以此作為標準,用Fluo4和Furared聯(lián)合作為鈣指示劑時,10~20 mmol/L苯丙氨酸降低神經(jīng)元胞質(zhì)游離鈣濃度;而當濃度降至5 mmol/L時,觀察不到明顯的胞質(zhì)游離鈣變化. 5~20 mmol/L的酪氨酸對胞質(zhì)游離鈣無明顯影響(結(jié)果未顯示)(Fig 1).
2.2苯乳酸對神經(jīng)元胞質(zhì)游離鈣的影響從Fig 2可以看到高濃度苯乳酸降低胞質(zhì)游離鈣,當苯乳酸濃度在5 mmol/L時,胞質(zhì)游離鈣先降低后逐漸升高,而當濃度為1 mmol/L時,胞質(zhì)游離鈣有升高的趨勢.
2.3苯乙酸對神經(jīng)元胞質(zhì)游離鈣濃度的影響10 mmol/L苯乙酸使胞質(zhì)游離鈣降低后升高,最后又降低. 加入Thapsigargin (終濃度100 nmol/L)到細胞外液中,胞質(zhì)內(nèi)鈣輕度升高. 加入Thapsigagin 3 min后,再加入10 mmol/L苯乙酸,胞質(zhì)內(nèi)鈣持續(xù)降低,此后沒有升高現(xiàn)象(Fig 3). 說明10 mmol/L苯乙酸使胞質(zhì)游離鈣降低后升高,是因為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣庫釋放鈣離子到胞質(zhì).
2.4低pH值鹽酸對神經(jīng)元胞質(zhì)游離鈣濃度的影響由于苯乙酸、苯乳酸為酸性物質(zhì),10 mmol/L苯丙氨酸、苯乙酸、苯乳酸的pH值分別為7.30, 4.12, 3.66, 為了分析苯丙氨酸、苯乙酸、苯乳酸降低神經(jīng)元胞質(zhì)游離鈣的作用是否由于這些物質(zhì)的化學特性酸性引起,我們將pH值為3.66 HCl溶液作用于神經(jīng)元,發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)游離鈣濃度升高(Fig 4).
2.5不同細胞外液條件下苯乳酸對神經(jīng)元胞質(zhì)游離鈣濃度的影響使用無鈉溶液細胞外液替換標準細胞外液,阻斷神經(jīng)元胞膜Na+/Ca2+交換; 使用無Ca2+的細胞外液,以阻斷胞外鈣流入細胞內(nèi),再加入10 mmol/L苯乳酸,均能使胞質(zhì)游離鈣降低. 在無鈉溶液細胞外液中,10 mmol/L苯乳酸使胞質(zhì)鈣有短暫輕度升高(Fig 5).
3討論
鈣離子是真核細胞內(nèi)最普遍的第二信使[4,5]. 胞質(zhì)游離鈣濃度由進入胞質(zhì)的鈣和離開胞質(zhì)的鈣兩方面的因素決定. 細胞外鈣通過鈣通道進入胞質(zhì)或者內(nèi)質(zhì)網(wǎng)或者肌質(zhì)網(wǎng)釋放鈣進入胞質(zhì),都可使胞質(zhì)游離鈣升高. 胞質(zhì)內(nèi)鈣可通過細胞膜Ca2+ATPase (Plasma Membrane Ca2+ATPase, PMCA)和Na+/Ca2+交換子離開胞質(zhì),也可通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)或者肌質(zhì)網(wǎng)上的Ca2+ATPase (sarcoplasmic/endoplasmic reticulum Ca2+ATPase, SERCA)回到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)或者肌質(zhì)網(wǎng). 線立體能螯和部分鈣離子然后緩慢釋放到胞質(zhì)[6]. 使胞質(zhì)游離鈣增多的疾病很常見,如老化、阿爾茨默氏病、缺血缺氧性腦病. 使胞質(zhì)靜息游離鈣降低的疾病少見,我們僅檢索到酸性磷脂酸和鉛中毒時鉛降低胞內(nèi)游離鈣濃度的相關(guān)文獻[7,8].
臨床資料提示氨基酸和鈣有一定關(guān)系. 飲食中富含高氨基酸會引起高鈣尿癥. 苯丙酮尿癥患兒有骨質(zhì)疏松、高鈣血癥、高鈣尿癥等癥狀[9]. Kostyuk等[10] 用電壓鉗記錄PC12細胞的高壓激活鈣通道,胞內(nèi)注射20 μmol/L苯丙氨酸使該通道電流降低(38±15)%,Dzhura等[11]提取PKU模型大鼠腦的mRNA,注入到非洲爪蟾的卵母細胞內(nèi),通過雙電極膜片鉗記錄到高壓激活的鈣通道電流,其電流明顯低于注入正常鼠腦mRNA的卵母細胞. 胃腸道細胞、甲狀旁腺細胞、少突膠質(zhì)細胞的胞膜存在一種鈣受體(calcium sensing receptor, CaR),其生理性配體主要是細胞外鈣. 已經(jīng)證實L型氨基酸,特別是芳香簇氨基酸,苯丙氨酸,色氨酸能激活膜上的鈣受體[12]. CaR在大腦主要表達于少突膠質(zhì)細胞和下丘腦神經(jīng)元,本實驗所用標本是大腦皮層的神經(jīng)元,所以我們沒有觀察到如Conigrave等[12]報道的現(xiàn)象. 本實驗所用的苯丙氨酸及其衍生物濃度較高,當使用低濃度時,觀察不到神經(jīng)元明顯的反應,這可能也與我們所用的檢測方法相關(guān),鈣成像沒有電生理方法敏感. 我們用基因芯片方法研究苯丙氨酸對未成熟原代神經(jīng)元基因表達譜的影響時所用的濃度是0.9 mmol/L,基因芯片的結(jié)果即顯示與鈣相關(guān)的蛋白表達水平發(fā)生改變.
本實驗觀察到,雖然苯丙氨酸及其衍生物最后都是降低神經(jīng)元胞質(zhì)游離鈣濃度,但它們的影響模式不一致. 不同濃度的苯丙氨酸一直降低神經(jīng)元胞內(nèi)游離鈣,酪氨酸對神經(jīng)元胞內(nèi)游離鈣無明顯影響,而苯乙酸及苯乳酸對神經(jīng)元胞內(nèi)鈣的影響比較復雜,可能與苯乙酸及苯乳酸的酸性特別強有一定關(guān)系. 用與10 mL苯乳酸相同pH值的稀鹽酸加到細胞外液中,結(jié)果神經(jīng)元胞質(zhì)游離鈣升高,這也和以前報道一致[13]: 酸中毒時氫離子可以激活神經(jīng)元內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣庫,使胞質(zhì)鈣升高. 單獨使用苯乙酸時,神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)鈣降低后有一升高現(xiàn)象;先用Thapsigargin抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的SERCA,再加入苯乙酸,則只有降低而無升高現(xiàn)象. 推測苯乙酸使神經(jīng)元內(nèi)鈣升高是由于苯乙酸的酸性引起的. 近年來發(fā)現(xiàn)苯乙酸和苯乳酸有特殊的藥理學作用. 如苯乙酸可以單獨或者聯(lián)合維甲酸誘導多種腫瘤細胞分化[14],在面粉內(nèi)加苯乳酸有抗真菌作用[15].
轉(zhuǎn)貼于
胞質(zhì)游離鈣降低可能是因為胞外鈣內(nèi)流減少,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)釋放鈣減少,或者是因為胞內(nèi)鈣外排增加. 我們用不含Ca2+的細胞外液代替標準細胞外液,10 mmol/L苯乳酸仍能降低神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)游離鈣;用Thapsigargin抑制SERCA, 10 mmol/L苯乙酸仍能降低神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)游離鈣. 我們推測苯丙氨酸及其衍生物可能主要通過促進胞內(nèi)鈣外排而降低胞質(zhì)內(nèi)游離鈣. 用不含Na+的細胞外液代替含Na+的細胞外液以阻斷細胞膜上Na+/Ca2+泵,結(jié)果10 mmol/L苯乳酸仍能降低神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)游離鈣. 我們推測苯丙氨酸及其衍生物至少能能通過激活PMCA,使胞質(zhì)內(nèi)鈣外排,導致胞質(zhì)靜息游離鈣濃度降低. 我們以前基因芯片的結(jié)果也提示在高濃度苯丙氨酸作用下,神經(jīng)元PMCA2b,2a基因表達水平下降. PMCA有4種異構(gòu)體,每種異構(gòu)體又產(chǎn)生多個剪切片段,與Ca2+的親和性很高,維持著細胞質(zhì)靜息[Ca2+] 在50~150 nmol/L水平[16]. PMCA2主要存在于神經(jīng)元,它與鈣調(diào)蛋白(calmodulin)的親和力是其他異構(gòu)體的3~4倍[17]. PMCA的活性受多種因素調(diào)節(jié)[18,19].
氨基酸不僅可以作為蛋白質(zhì)合成的底物,它可在基因轉(zhuǎn)錄、蛋白翻譯、蛋白降解等不同水平調(diào)節(jié)細胞的功能. 不能透過細胞膜和不能繼續(xù)被細胞代謝的亮氨酸和苯丙氨酸的類似物能引起與亮氨酸和苯丙氨酸作用一致的結(jié)果,可能細胞膜上就存在著氨基酸受體或者感受器,識別不同的氨基酸,引起胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導[20]. 在酵母細胞膜上發(fā)現(xiàn)了能感受胞外氨基酸濃度的復合體Ssy1pPtr3pSsy5p[21]. PMCA是否是膜上苯丙氨酸的感受器,是否苯丙氨酸通過PMCA影響胞質(zhì)內(nèi)鈣離子濃度,進而引起一系列胞質(zhì)內(nèi)反應還需進一步研究.
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【關(guān)鍵詞】 原始生殖細胞;細胞分化;Western 免疫印跡;神經(jīng)干細胞;小鼠
[ABSTRACT] Objective: To explore the inducing effect of microencapsulation on differentiation of PGCs(primordial germ cells) into neuronal cells. Methods: Took cerebra from the 13days old mouse embryos,encapsulated neuronal stem cells(NSCs) collected from the cerebra into microencapsulation. EBs(embryoid bodies) were formed from the PGCs collected from13 days mouse embryos by suspension culture. The microencapsulation were put in the culture plates after the EBs were plated on gelatincoated culture plates. Furthermore, the same amount of EBs were plated on gelatincoated culture plates without microencapsulation for spontaneous differentiation. The neuronal cells were detected with NESTIN, NSE and GFAP immunohistochemical staining. Results: The rate of differentiation by microencapsulation was distinctly higher than the rate of spontaneous differentiation. Conclusion: The nutritional components secreted from the microencapsulation enter the culture medium and can induce the differentiation of EBs into neuronal cells effectively.
[KEY WORDS] Primordial germ cell; Cell differentiation; Western blot; Neuronal stem cells; Mouse
原始生殖細胞(primordial germ cells, PGCs)是一種胚胎源性干細胞,具有體外分化為各種組織的能力[1],我們已探討了其體外自發(fā)分化的能力,發(fā)現(xiàn)其分化為神經(jīng)樣細胞的百分比最大。為了進一步提高神經(jīng)樣細胞的分化率,本文將重點探討PGCs向神經(jīng)樣細胞定向分化的新方法,即微囊誘導法。
1 材料與方法
1.1 材料
ICR小鼠。
1.2 方法
1.2.1 PGCs的分離、提取和體外培養(yǎng) 實驗使用自配13 d胎鼠,取兩側(cè)生殖嵴,用PBS洗3次后添加0.25%胰蛋白酶消化,吹打,然后過60目細胞篩,將PGCs按2.5×106/mL的密度接種于35 mm的培養(yǎng)瓶中進行體外培養(yǎng)。
1.2.2 懸浮培養(yǎng) (1)類胚體(embryoid bodies, EBs)的形成:取分離提取的PGCs,置于培養(yǎng)瓶中進行懸浮培養(yǎng),培養(yǎng)期間每隔1~2 h搖晃1次培養(yǎng)瓶防止PGCs貼壁。換液方法:將含細胞的培養(yǎng)液放入離心管里1 000 r/min離心10 min,棄上層液體,補足培養(yǎng)液。(2)EBs的鑒定: 使用免疫組織化學法,對EBs進行甲胎蛋白(alpha fetoprotein, AFP)標記,將懸浮培養(yǎng)4 d的EBs經(jīng)4%多聚甲醛固定15 min,然后用甲醇在-20℃固定5 min,5%BSA覆蓋EBs,處理45 min以封閉非特異性染色。然后滴加一抗(兔抗人AFP多克隆抗體工作液購自中杉公司,ZA0008),在4 ℃孵育過夜,繼之滴加生物素化山羊抗兔IgG,最后滴加DAB顯色。
1.2.3 微囊制作 (1)神經(jīng)干細胞的提取及鑒定:①將孕13 d 胎鼠的大腦半球取出,在解剖鏡下剝?nèi)ボ浤X膜,然后將其置于預冷的含有谷氨酰胺的高糖DMEM培養(yǎng)液中,最后用PBS沖洗3遍,再加入0.25%胰蛋白酶于37 ℃水浴消化10 min,每3 min搖勻1次。消化完畢后將消化液吸出,然后加入培養(yǎng)液終止消化,吹打成單細胞懸液后放入37 ℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。所用培養(yǎng)液為高糖DMEM,內(nèi)添加10% FBS(Hyclone)和200 mM L谷氨酰胺(Lglutamine, LGlu)(Hyclone)和1∶1的青鏈霉素。②將形成的神經(jīng)球放入預先用0.05%PL多聚賴氨酸(Sigma)包被的含有蓋玻片的小皿中培養(yǎng)24 h后,使用免疫組化的方法對神經(jīng)干細胞巢進行Nestin標記。(2)微囊制作:首先將含原代NSCs的培養(yǎng)液1 000 r/min,離心5 min, 加入上述培養(yǎng)液調(diào)整NSCs的濃度為1.8×106/mL,將該細胞懸液與1.5%海藻酸鈉(Sigma)1∶1混合,避免氣泡的產(chǎn)生。然后用裝有4號針頭的1 mL注射器將液滴均勻并快速的滴入含1.1%CaCl2的小皿中,形成凝膠珠,吸掉CaCl2后加入0.05%PL多聚賴氨酸(Sigma)作用6 min, 然后再用1% CaCl2(北京紅星化工廠)清洗2遍,再與0.15%海藻酸鈉作用5 min,用1% CaCl2和0.9%NaCl分別清洗,最后再與0.05 mol/L檸檬酸鈉(北京化工廠)作用6 min,用0.9%NaCl清洗,然后放入培養(yǎng)液培養(yǎng)。
1.2.4 EBs的體外分化 (1)微囊的定向誘導分化:懸浮培養(yǎng)第4天后,收集含有EBs的培養(yǎng)液,800 r/min離心5 min,棄上層液體,下層留有0.2~0.3 mL液體輕輕吹打,然后將液體放入0.1%明膠包被的24孔板中,實驗分兩組,一組是待EBs貼壁后將微囊放入孔板中,每孔放入10個微囊,另一組則不加微囊讓其自發(fā)分化,每組分別重復做6次。(2)分化細胞的鑒定:使用免疫組織化學法,對分化的神經(jīng)樣細胞進行NESTIN、NSE和GFAP標記。將分化的細胞用4%多聚甲醛固定15 min,然后用甲醇在-20 ℃固定5 min,再用5%BSA覆蓋細胞處理45 min以封閉非特異性染色。然后分別滴加一抗(兔抗Nestin多克隆抗體;鼠抗人NSE單克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司,ZM0203;兔抗人GFAP多克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司,ZA0117),然后在4 ℃孵育過夜,繼之滴加生物素化山羊抗兔IgG,最后滴加DAB顯色。
2 結(jié)果
2.1 EBs的形成與鑒定
PGCs經(jīng)4 d懸浮培養(yǎng)后,便可逐漸形成簡單類胚體(simple embryoid body, SEB),自第5天起SEB內(nèi)部出現(xiàn)腔隙,隨后逐漸擴大直到第2周形成囊狀EBs(cystic embryoid body, CEB)。EBs的形成率見表1。EBs外周可見內(nèi)胚層細胞,經(jīng)免疫組織化學法進行AFP標記,可見EBs外圍的細胞呈陽性反應。
2.2 神經(jīng)干細胞微囊的形態(tài)學觀察及鑒定
2.2.1 神經(jīng)干細胞微囊的形態(tài)學觀察 細胞微囊大小較均一,呈球行,邊界清楚,直徑400~700 μm,微囊分散良好且之間無粘連,囊內(nèi)細胞密集,單個細胞呈圓形且折光性強,每個微囊含有9 000~10 000個神經(jīng)干細胞。表1 EBs形成率與分化率
2.2.2 神經(jīng)干細胞的鑒定 當培養(yǎng)24 h后可見NSCs聚集形成神經(jīng)球,折光性強,立體感強并且懸浮生長,神經(jīng)球形成后有相互聚集的傾向,自身不斷增殖且數(shù)目不斷增多。將貼于蓋玻片上的神經(jīng)球進行神經(jīng)干細胞標記巢蛋白(nestin)染色,結(jié)果顯示Nestin免疫染色呈陽性,陽性部位呈黃褐色,證明神經(jīng)球確為神經(jīng)干細胞。
2.3 分化細胞的鑒定以及分化率
分別做NESTIN、NSE和GFAP的免疫組化染色,結(jié)果都為陽性,說明分化細胞中包括神經(jīng)前體樣細胞、神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞。自發(fā)分化有60%分化為神經(jīng)樣細胞,上皮樣細胞和成纖維樣細胞各占總數(shù)的20%和18%,而微囊誘導則有100%分化為神經(jīng)樣細胞。實驗組與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P
3 討論
在PGCs的定向誘導分化方面,一般采用添加誘導因子法[2],我們則嘗試著采用一種新方法即微囊誘導法。目前所用制作微囊的材料和結(jié)構(gòu)多為海藻酸鈉多聚賴氨酸海藻酸鈉(AlginatePolylysine Alginate, APA),這種結(jié)構(gòu)的膜具有較好的生物相容性,可減少鄰近細胞的過度生長[3]。微囊的優(yōu)點在于,微囊是一種半透膜,細胞分泌的小分子營養(yǎng)物質(zhì)可自由透過,而且這種半透膜也不影響氧、葡萄糖和生長因子等低分子物質(zhì)的通過。另一方面可以將誘導物與貼壁的EBs分開,避免了兩者的相互作用從而更清晰的看到分泌物是否對生殖干細胞的分化有一定的誘導作用。經(jīng)微囊誘導分化出來的細胞免疫組化鑒定100%為神經(jīng)樣細胞;而自發(fā)分化的細胞60%為神經(jīng)樣細胞。說明微囊誘導可明顯提高細胞的分化率。NSCs是一種未分化的神經(jīng)前體細胞,能分泌多種細胞因子,其在體外模擬的神經(jīng)細胞發(fā)育的早期微環(huán)境較神經(jīng)元模擬的微環(huán)境更為原始和類似于體內(nèi)[4]。總之,胚胎源性干細胞的分化研究在整個干細胞研究中占據(jù)著重要的位置,因為它將會在臨床應用中發(fā)揮著非常重要的作用。它最令人矚目之處在于它可以作為移植療法的"種子"細胞,治療各種難治性疾病,包括帕金森病、糖尿病、脊髓外傷、慢性心臟疾病、肝臟衰竭和腫瘤等。這種方法不僅可以彌補當今器官移植所面臨的供體匱乏問題,而且還可避免移植過程中引起的免疫排斥問題,因為可借助于基因工程技術(shù)對干細胞表面的MHC分子進行修飾。可見胚胎源性干細胞在基礎(chǔ)研究和臨床應用方面有著廣闊的前景。但目前為止人們還沒掌握其定向分化的一般規(guī)律,需要我們進一步的探討。
參考文獻
1 Rohwedel J, Sehlmeyer U, Shan J, et al.Primordial germ cellderived mouse embryonic germ (EG) cells in vitro resemble undifferentiated stem cells with respect to differentiation capacity and cell cycle distribution[J].Cell Biol Int,1996,20(8):579587.
2 Guan K, Chang H, Rolletschek A, et al. Embryonic stem cell derived neurogenesis. Retinoic acid induction and lineage selection of neuronal cells[J]. Cell Tissue Res, 2001,305(2):171176.