前言:一篇好文章的誕生,需要你不斷地搜集資料、整理思路,本站小編為你收集了豐富的大學生鑒定表主題范文,僅供參考,歡迎閱讀并收藏。
我體會深刻的一點是:理論要與實踐相結合。其實很多東西在學校的時候我都學習過,但知道的都是理論,知道操作步驟,卻沒有多少實踐,甚至都沒有考慮到按照這些步驟去做的時候,也會出現很多的問題以及要如何去解決這些問題。在遇到問題的時候我全面的思考,不讓自己的思想有局限性。
我謙虛謹慎,勤奮好學。注重理論和實踐相結合,將所學的課堂知識能有效地運用于實際工作中,認真聽取老員工的指導,對于別人提出的工作建議,可以虛心聽取。表現出較強的求知欲,并能夠仔細觀察、切身體驗、獨立思考、綜合分析,靈活運用自己的知識解決工作中遇到的實際困難。
工作中踏實肯干,吃苦耐勞。有創造性、建設性地獨立開展工作的思維;具有一定的開拓和創新精神,接受新事物較快,涉獵面較寬,有自己的思路和設想。能夠做到服從指揮,認真敬業,工作責任心強,工作效率高。
這篇是小編特地為大家整理的大學畢業生自我鑒定畢業生登記表,希望對大家有所幫助!
大學四年生活即將隨著我的成長而慢慢逝去,回顧這豐富多彩的四年學習生活,我已在老師的辛勤培育下成長為一名品學兼優的合格大學生了,這些日子將永遠銘記在我心中。這四年在學習階段,思想上要求上進,認真學習,努力鉆研專業知識,畢業之際,回顧四年來的學習,工作及生活,做自我鑒定如下:
四年的大學生活,使我對人生觀,價值觀,世界觀都有了更深的認識。我的為人之道——以誠待人,待事、堅持信念行動創造價值、自我創新。
如今回首,是對過去的審視和總結,亦是對未來的憧憬和希望,即將踏出校門的我,滿心期待大千世界的挑戰和磨練。
深知性命相托的重要,從踏入學校門檻的那天起,在良師的精心指導下,自己奮力拼搏,自強不息,逐漸成為了一個能適應社會要求的大學生,并為做一個知識型的社會主義建設者打下堅實的基礎。
生活方面,自從來到湖南第一師范學院,我的生活充滿了愛,充滿了情。同學之間的情猶如親情但更勝親情,朋友之間的情猶如手足之情,湖南第一師范學院事我都很是關心,就這樣我愛上了湖南第一師范學院的每個人,每件事物。同時獨立自主的生活在我的美好的大學三年中也就這樣成熟了起來,我也就體會到了大學獨立自主的生活是我們進入社會的生活的根本。
學習方面,自我進湖南第一師范學院的第一天起,我就沒有忘記我來湖南第一師范學院的目的——學好知識,學會做人。在湖南第一師范學院,雖然我在有些方面得到了肯定,但我真正實現自我價值還需要更加努力,讀到到老,學到老也就成了我最基本的思想。
思想方面,我經過班級的初選,到系審核,再到院的批準,我成了湖南第一師范學院美術系第12期入積極分子黨培訓中的一員,并經過學習與考核,成績合格成為了入黨積極分子。我就由一個對我們黨了解一點到了解了我們黨的人。
工作方面,在寒暑假期實習中,我知道了事業的偉大和一個人的付出與成就。在大學生的社會實踐活動中我得到了找工作比較難的啟發,啟發我要克服困難勇于直前。
一、思想上高度重視
這幾年的工作,使我充分認識到之前在校所學的知識及工作經驗在一定程度上已經不能滿足今后的工作需要,急需補充相關理論、專業技能知識。
在xx大學的學習,我在思想上有很大的覺悟,認識到這次學習,讓我學到不少理論知識,將對我的知識更新以及素質提高幫助不少,并且能夠學到今后工作需要的理論知識、專業技能及工作經驗,不斷增強工作辦事能力,為比較順利地完成各項工作創造了良好條件。為了保證能夠安心學習,順利地完成各門課程,我就提前把要參加學習期間的事務做出合理安排,確保能夠全身心參加上課階段的學習。
二、認真學習,嚴守紀律
由于不同于全日制的授課方式,除了面授的機會外,可以說大部分時間要靠我們自學去完成。為了提高自已,我特別珍惜這次學習的機會。我能正確處理好工作與學習的關系,把學習當作完善自身的需求,把學習當成促進工作的動力。在工作之余,我認真閱讀教學材料,仔細領會每門課程所講述的內容,做到課前預習了解,把不明白的內容帶到課堂,向教師請教;課后復習鞏固。這次函授的教師,是一些從事教學活動幾十年的優秀教師,他們的豐富理論知識以及理論聯系實際工作經驗吸引了我,增加了我學習的信心和決心。對老師的輔導總能傾心、安心、靜心地聆聽,認真地圈劃重點,按類別認真做好筆記,既兼顧基礎知識,又突出重點內容; 回家后舍得化時間,根據復習提綱認真地讀書,認真地背誦記憶,做到在理解基礎上背記,在背記基礎上理解。
在整個學習過程中,能夠合理使用科學的學習方法,充分利用時間,勤學苦練;虛心向同學和教師請教;能夠嚴守學院各項紀律和規章制度;做到尊敬教師和同學。 經過二年的學習,起到事半功倍的效果。二年的大學學習生涯和社會實踐活動,是我不斷挑戰自我、充實自己的一段光輝歷程。
三、珍惜機會,受益匪淺
誠然,在校學習其間,有過成功的喜悅,也有留下探索的苦惱與挫折。在這里,老師的博學,講課的場景,使我終身難忘;同學之間的真誠,那份純潔,真摯仿佛讓我一下子回到了從前的學生時代。
【關鍵詞】 ULBP4;,NKG2D;,IFN
Expression and biological function of ULBP4 in RosettagamiTMB(DE3) and mAb preparation
[Abstract] AIM: To express human ULBP4 in RosettagamiTMB(DE3) and to prepare monoclonal antibody against ULBP4 for the research of γδT cells recognition mechanism. METHODS: DNA fragments of ULBP4 were derived from HO8910 RNA by reversetranscriptase polymerase chain reaction(RTPCR). The fragments encoding the former 225 amino acids of ULBP4 were cloned into Histag fusion protein expression vector pET22b(+). The CHistag fusion ULBP4(225a) protein was expressed in inclusion body and purified step by step according to manufactory’s protocol and renatured in bag filter. It’s functional effect on NK cells was evaluated by NKG2D binding assay and IFNγ secretion experiments. Prokaryotic expressed human ULBP4 was used as an antigen to prepare monoclonal antibodies by means of the B lymphocyte hybridoma technique. RESULTS: ULBP4 recombinant protein can stimulate NK cells to secrete IFNγ. Through PEG fusion and screening by limited dilution, we obtained four strains of hybridoma cells secreting antiULBP4 antibodies. CONCLUSION: The fusion protein was expressed successfully and functional. At the same time, the antiULBP4 mAbs were prepared successfully. Both of them provide a platform for further research.
[Keywords]ULBP4; NKG2D; IFNγ; RosettagamiTMB(DE3) E.coli; Expression; Biological function; monoclonal antibody
[摘 要] 目的: 在大腸桿菌中表達ULBP4重組蛋白, 并制備其特異性的單克隆抗體(mAb), 為γδT細胞對ULBP4的識別機制研究奠定基礎。方法: 根據GenBank中ULBP4的基因序列設計相應的引物, 用RTPCR方法從HO8910細胞中擴增得到ULBP4片段, 構建重組原核表達質粒pET22b(+)/ULBP4(前225aa胞外段), 在RosettagamiTMB(DE3)大腸桿菌中獲得表達且主要位于包含體中, 經純化透析復性后, 分析其對NK細胞IFNγ細胞因子分泌的影響。以ULBP4為抗原, 免疫BALB/c小鼠, 取免疫小鼠脾細胞和Sp2/0骨髓瘤細胞常規融合, 依次經HAT選擇培養、 間接ELISA法、 克隆化培養、 熒光免疫檢測和流式細胞術以及Western blot篩選和鑒定抗ULBP4 mAb的雜交瘤細胞株。結果: 構建了pET22b(+)/ULBP4(225aa)原核表達體系, 并檢測到重組蛋白的有效表達; 純化的重組蛋白在體外培養體系中可以刺激NK細胞IFNγ細胞因子的分泌。此外, 還獲得了4株可穩定分泌抗人ULBP4 mAb的雜交瘤細胞株。結論: 成功地構建并表達了具有生物活性的ULBP4, 為γδT細胞的識別機制研究建立抗原制備平臺, 同時所制備的抗人ULBP4 mAb, 為后續研究奠定了基礎。
[關鍵詞]ULBP4; NKG2D; IFNγ; RosettagamiTMB(DE3)大腸桿菌; 表達; 生物學功能; 單克隆抗體
NKG2D是一種激活性的C型凝集素受體, 由同源二聚體構成, 表達于多種淋巴細胞的表面。近幾年, 發現了一種新的NKG2D的配體家族UL16 binding proteins(ULBPs又稱為RAET1分子)[1, 2], 其中, ULBP13為糖基磷脂酰肌醇連接的膜蛋白, 而ULBP4和RAET1G則為含跨膜區域和胞內區域的膜蛋白。它們在正常組織細胞表面不表達或表達量很低, 但病毒感染和細胞惡性轉化后能明顯增強其表達, 暗示了它們在抗感染免疫和腫瘤免疫中潛在的作用。序列分析提示其與MICA較為相似, 且都屬于延伸的MHCI類分子家族, 但只含α1和α2功能域且不能呈遞小肽。鑒于其序列上與MICA的相似性, 提示其可能也為γδ1T細胞群的抗原之一[3]。事實上, 已有證據表明其中的一個分子ULBP3可以被慢性B型淋巴細胞性白血病患者外周血的γδ1T細胞群所識別[4]。為了進一步加深對γδT細胞識別機制的認識, 我們在原核表達系統中表達并純化了ULBPs家族的另外一個成員ULBP4, 同時制備其單克隆抗體(mAb), 為今后的研究工作奠定實驗基礎。
1 材料和方法
1.1 材料 克隆載體pGEMT Easy Vector System購自Promega公司, 原核表達質粒pET22b(+)和宿主菌RosettagamiTMB(DE3) E.coli均購自Novagen公司, DH5α菌為本室保存。HO8910人漿液性卵巢腺癌細胞株、 803人低分化胃腺癌細胞系以及CHO中國倉鼠腎細胞系也為本室保存, 均以含100 mL/L小牛血清的RPMI1640完全培養液進行貼壁培養。而Hep G2人肝癌細胞系則以含100 mL/L小牛血清的MEMNEAA完全培養液進行貼壁培養(HO8910、 803、 Hep G2均為ULBP4 mRNA陽性的細胞株)。NK92細胞由中國科學技術大學生命科學院免疫學研究所田志剛教授惠贈, 以含125mL/L的胎牛血清、 125mL/L的馬血清以及200U/mL IL2的MEMα培養液進行懸浮培養。Sp2/0小鼠骨髓瘤細胞為本室保存。細胞培養用RPMI1640購自Gibco BRL公司。Trizol試劑購自Invitrogen公司, Tag DNA 聚合酶和T4 DNA連接酶購自MBI公司。小量質粒制備試劑盒、 MMV逆轉錄酶、 Oligo(dT)15 Primer、 RNA酶抑制劑、 Xgal均購自Promega公司。Nde I, Xho I限制性內切酶購自NEB公司。PCR產物切膠回收試劑盒購自TaKaRa公司。HisTrap kit Ni親和柱購自美國安瑪西亞公司。IPTG、 氧化型還原型谷胱苷肽購自MERCK公司。Histag mAb購自北京天為時代公司。HRP和FITC標記的羊抗鼠IgG均購自北京中山公司。Western blot的化學發光底物supersignal West Pico購自Pierce公司。硝酸纖維素膜購自美國安瑪西亞公司。NKG2DFc融合蛋白和人IFNγ細胞因子檢測試劑盒購自R&D公司。次黃嘌呤(H)、 氨基喋呤(A)、 胸腺嘧啶(T)、 弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑以及PEG4000購自Sigma公司。BALB/c近交系小鼠(8周齡, 雌性),
購自中國藥品和生物制品鑒定所嚙齒類實驗動物中心。
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1.2 方法
1.2.1 ULBP4全長cDNA的擴增和克隆 根據GenBank中ULBP4的基因序列設計相應的引物, 于編碼的5′和3′端各設計一條引物P1、 P2, 同時設計編碼前225個氨基酸的下游引物P3, 以上引物均由北京奧科生物技術有限公司合成: P1: 5′ GGAATTCCATATGCGAAGAATATCCCTGACTT 3′; P2: 5′ CCGCTCGAGAGACGTCCTCAAGGGCCAGA 3′; P3: 5′ CCGCTCGAGATCTGGTAGACTAGAAGAAGACC 3′。其中, 斜體代表添加的酶切位點(Nde I和Xho I)和保護堿基。按照Trizol試劑盒的說明書提取RNA同時進行逆轉錄, 以cDNA為模板, 擴增全長的ULBP4基因片斷, 上游引物為P1, 下游引物為P2。擴增條件為: 94℃ 30 s, 60℃ 45 s, 72℃ 90 s, 共進行30個循環, 最后72℃再延伸10 min。擴增出的片段用T4 DNA連接酶克隆入載體pGEMT Easy Vector System, 用CaCl2法轉化大腸桿菌DH5α, 用Xgal和IPTG進行藍白斑篩選, 陽性重組子經菌液PCR和測序分析證實(由上海博亞生物技術有限公司完成)。同時使用小量質粒制備試劑盒提取測序正確的陽性質粒。
1.2.2 ULBP4(225aa)原核表達質粒pET22b(+)的構建和誘導表達 以測序正確的陽性質粒為模板, P1和P3引物對擴增ULBP4(225aa)片段, PCR產物經切膠純化回收后, 使用Nde I、 Xho I限制性內切酶直接雙酶切, 37℃過夜。將雙酶切的產物純化回收后連入原核表達載體pET22b(+)同時轉化大腸桿菌DH5α, 氨芐抗性的陽性重組子經菌液PCR和測序分析證實與預期結果相符(由上海博亞生物技術有限公司完成)。測序正確的原核表達載體pET22b(+)/ULBP4(225aa)質粒轉化RosettagamiTMB(DE3) E.coli, 挑取克隆菌接種于50 mL LB培養液中(氨芐青霉素 100 μg/mL), 37℃振蕩培養過夜。次日以1∶100的比列轉接于1L2×YT培養液中, 37℃振蕩培養, 當A600值達到06~08時加入IPTG(至終濃度為05 mmol/L)進行誘導, 37℃振蕩繼續培養4 h。
1.2.3 ULBP4的分離純化和復性 離心收集菌體, 經超聲破碎后高速離心獲得包含體, 3 mol/L尿素反復洗滌后溶于8 mol/L的尿素中。按照安瑪西亞公司的說明書過柱純化ULBP4。收集純化的樣品進行SDSPAGE電泳以及Western blot檢測。將純化后的樣品裝入透析袋中, 梯度降低尿素的濃度同時在尿素濃度為2 mol/L時補加氧化型還原型谷胱苷肽, 最后換成PBS并透析3次。
1.2.4 ULBP4的生物學功能鑒定 (1)以1 μg/孔的人NKG2D重組蛋白包被96孔板, 4℃過夜, 以含5mL/LTween20的PBS洗滌3次, 用20 g/L BSA于37℃封閉1 h, 洗滌3次后分別加入ULBP4以及帶His標簽的無關蛋白, 37℃孵育1 h, PBST洗滌3次后加入抗Histag的mAb, 37℃孵育1 h, PBST洗滌3次后加入HRP酶標羊抗鼠二抗, 37℃孵育1 h, 再次以PBST洗滌5次, 并用重蒸水洗滌3次。OPD底物顯色系統顯色5~10 min, 測定A490/630值。(2)以10 μg/孔包被24孔板, 離心收集NK92細胞, 調整細胞密度為5×105/孔, 37℃培養24 h后收集上清, 用R&D公司的人IFNγ檢測試劑盒分析培養上清中的含量。
1.2.5 抗ULBP4 mAb的制備 取50 μg的ULBP4原核表達蛋白和弗氏完全佐劑混合后皮下多點注射小鼠, 然后分別在第14天, 21天, 28天使用同劑量的抗原和弗氏不完全佐劑混合后皮下多點注射小鼠。融合前3 d, 尾靜脈加強注射1次。取免疫小鼠的脾細胞和Sp2/0骨髓瘤細胞在PEG的作用下融合, 在HAT選擇性培養基中進行篩選, 并經有限稀釋克隆化培養獲得雜交瘤細胞株。
1.2.6 抗ULBP4 mAb的特性鑒定 (1)間接ELISA法檢測抗體: 以1 μg/孔ULBP4抗原包被96孔板, 并設立空白、 陰陽對照, 37℃包被過夜。以含5 mL/L Tween20的PBS洗滌5次, 并用含20 g/L BSA的PBS于37℃下封閉2 h, 再次以含5 mL/L Tween20的PBS洗滌5次。加入待測的細胞培養上清, 37℃孵育1 h, 以含5 mL/L Tween20的PBS洗滌5次。加入HRP酶標羊抗鼠二抗, 37℃孵育1 h, 以含5 mL/L Tween20的PBS洗滌5次,并用重蒸水洗滌3次。OPD底物顯色系統顯色5~10 min, 測定A490/630值。(2)間接免疫熒光法檢測抗體: 分別將803、 Hep2、 Hep G2、 CHO細胞和穩定表達ULBP4的CHO細胞接種24孔板, 37℃培養48 h后, PBS洗滌5次, 用40 g/L多聚甲醛冰上固定30 min。以含50 g/L BSA的PBS于4℃封閉過夜。次日, PBS洗滌5次后加入待測樣品, 37℃孵育1 h, 以PBS洗滌5次。加入FITC酶標羊抗鼠二抗, 37℃孵育30 min, 以PBS洗滌5次, 并用重蒸水洗滌3次。于熒光顯微鏡下檢測。(3)流式細胞術分析: 收集待測細胞, PBS洗3次, 吸盡上清, 于每管分別加入抗ULBP4 mAb, 4℃, 孵育60 min。離心, PBS洗3次, 加入FITC酶標羊抗鼠二抗, 4℃, 孵育60 min。離心, PBS洗3次, 加入500 μL PBS固定液, 4℃保存, 進行流式細胞術常規熒光分析。
2 結果
2.1 重組表達載體的構建以及鑒定 首先采用RTPCR方法從HO8910細胞中擴增出ULBP4全長基因, 測序結果證實所擴增的基因完全正確。然后再以P1和P3引物擴增出ULBP4的胞外段(225aa), PCR產物大小分別為:ULBP4全長808 bp、 ULBP4胞外段694 bp(片段大小均包含酶切位點和保護堿基序列), 見圖1。用Nde I和Xho I限制性內切酶將ULBP4胞外段克隆入原核表達載體pET22b(+)。將連接產物轉化大腸桿菌DH5α, 抗生素篩選后的陽性克隆經菌液PCR鑒定, 取其中的陽性克隆進行測序。根據序列比較, pET22b(+)中插入片段的序列與GenBank中的序列一致。重組質粒載體的雙酶切鑒定見圖2。
圖1 ULBP4全長和ULBP4胞外段PCR結果(略)
Fig 1 The PCR products of ULBP4 and the outer part segment
1: ULBP4; 2: The outer part segment of ULBP4; 3: DNA marker.
圖2 pET22b(+)/ULBP4(225aa)原核表達重組質粒的雙酶切鑒定(略)
Fig 2 Identification of recombinant vector pET22b(+)/ULBP4(225aa) digested by Nde I and Xho I
1: Recombinant vector pET22b(+)/ULBP4(225aa) digested by Nde I and Xho I; 2: DNA marker.
2.2 ULBP4蛋白在大腸桿菌中的誘導表達和分離純化 ULBP4蛋白的原核表達系統在05 mmol/L IPTG和37℃條件下誘導4 h, 表達以包含體為主, 相對分子質量(Mr)約為25000。鎳柱純化后目的蛋白經SDSPAGE電泳和Western blot證實Mr在31000左右有一蛋白帶, 與預期大小相符(圖3)。
圖3 大腸桿菌誘導后的SDSPAGE電泳(A)及ULBP4的Western blot(B、 C)結果(略)
Fig 3 SDSPAGE (A) and western blot analysis (B and C) of ULBP4 expressed in RosettagamiTMB(DE3)
(A) 1: Uninduced supernant of cell lysate by sonication; 2: Induced supernant of cell lysate by sonication; 3: Uninduced precipitate of cell lysate by sonication; 4: Induced inclusion body of cell lysate by sonication; 5: Purified ULBP4 protein; M: Low molecular marker proteins. (B) 1: ULBP4 detected with AntiHistag mAb; M: Low molecular marker proteins. (C) 1: ULBP4 detected with AntiULBP4 mAb 10F7; M: Low molecular marker proteins.
2.3 體外NKG2D結合實驗和細胞因子分泌實驗 間接ELISA檢測結果顯示: 原核表達復性后的ULBP4能與人NKG2D結合, 而帶His標簽的無關蛋白則不能與之結合, 說明復性后的ULBP4仍能維持正確的天然構像。此外, 細胞因子分泌實驗顯示: 雖然NK92細胞有一定的本底表達, 但經ULBP4刺激后NK92細胞的IFNγ分泌明顯增強。
圖4 ULBP4刺激NK92細胞分泌IFNγ(略)
Fig 4 ULBP4 stimulated NK92 cells to secrete IFNγ
2.4 雜交瘤細胞株的建立 通過細胞融合、 篩選以及克隆化培養, 獲得了4株可穩定分泌高效價mAb的雜交瘤細胞株6C12、 8C9、 8G1及10F7。
2.5 抗人ULBP4 mAb的特性鑒定 熒光免疫檢測和流式細胞術結果顯示以上4株雜交瘤細胞株所分泌的mAb能識別天然的ULBP4。部分結果見圖5和圖6。
圖5 抗ULBP4 mAb的熒光免疫技術檢測(略)
Fig 5 Immunofluorescence assay of the characterization of antiULBP4 mAbs
A: CHO cells stained with antiULBP4 mAb 8C9; B: ULBP4CHO cells stained with antiULBP4 mAb 8C9; C: HO8910 cells stained with antiULBP4 mAb 8C9; D: HO8910 cells stained with antiULBP4 mAb 6C12.
圖6 抗ULBP4 mAb的流式細胞術分析(略)
Fig 6 Flow cytometry assay of the characterization of antiULBP4 mAbs
3 討論
γδT細胞作為第3種特異的免疫細胞, 雖然在人體T細胞群體中只占很少的比例, 但在抗感染免疫、 免疫監視、 免疫調節以及專職的抗原提呈方面都起重要的作用[5, 6]。最近一項相關的研究表明慢性B型淋巴細胞性白血病患者外周血的γδ1T細胞群可以識別ULBP3[4], 然而遺憾的是未能對ULBP家族的其他成員進行相關的研究。為此, 我們在原核系統中表達了ULBP4, 所表達的ULBP4可刺激NK92細胞分泌IFNγ, 表明包含體表達復性后的蛋白仍有活性, 為進一步研究γδ1TCR對ULBP的識別機制奠定了基礎。值得注意的是, 在進行原核表達的過程中首先使用的是傳統的BL21(DE3)表達菌, 但是未能獲得表達。而后我們從Novagen公司引進RosettagamiTMB(DE3)表達菌, 該菌本身有3種抗性(氯霉素、 卡那霉素和四環素), 可以提供稀有堿基, 在05 mmol/L IPTG誘導下獲得了高效表達。此外, 2006年有報道在淋巴細胞白血病患者的外周血中能檢測到游離性的ULBP2, 而在健康人中則檢測不到, 這一過程是由金屬蛋白酶所介導的, 表明了其在腫瘤逃逸中潛在的作用[7]。除此以外, RAET1G在RNA水平發生選擇性的剪切也能生成無跨膜區和胞內區的游離性的ULBP。因此, 我們所制備的ULBP4 mAb還為ULBP4所介導的腫瘤逃逸機制研究奠定了基礎。
參考文獻
[1] Bacon L, Eagle RA, Meyer M, et al. Two human ULBP/RAET1 molecules with transmembrane regions are ligands for NKG2D[J]. J Immunol, 2004,173(2): 1078-1084.
[2] Cosman D, Mullberg J, Sutherland CL, et al. ULBPs, novel MHC class Irelated molecules, bind to CMV glycoprotein UL16 and stimulate NK cytotoxicity through the NKG2D receptor[J]. Immunity, 2001, 14(2): 123-133.
[3] Cao W, He W. UL16 binding proteins[J]. Immunobiology, 2004, 209(3): 283-290.
[4] Poggi A, Venturino C, Catellani S, et al. Vdelta1 T lymphocytes from BCLL patients recognize ULBP3 expressed on leukemic B cells and upregulated by transretinoic acid[J]. Cancer research, 2004, 64(24): 9172-9179.
[5] Hayday AC. γδ cells: a right time and a right place for a conserved third way of protection[J]. Annu Rev Immunol, 2000, 18: 975-1026.
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高等學校畢業生登記表自我鑒定
一直以來堅持著人活到老學到老的學習理念,我于2006年通過成人高考考入廣州城市職業學院。在這三年中,我積極參加政治學習,關心國家大事,認真學習“三個代表”的重要思想,擁護黨的各項方針政策。遵守校紀校規,尊敬師長,團結同學,政治上要求進步;學習目的明確,態度端正,爭做一個有高尚思想品德的公民。
大學對于我們這群接受成人教育的大學生來說有著更深刻的含義,通過社會的實踐和自我的發現,大學對于我們來說更多的是對知識的渴望與需求,所以在學習上我熱愛自己的專業,學習認真刻苦,要求自己在專業知識和各項技能上全面發展,對學習一絲不茍,認真完成學校規定的學習任務且取得優良成績。作為學生干部,我時刻嚴格要求自己,有強烈的集體榮譽感和工作責任心,對班委工作認真負責,關心同學,熱愛集體。
三年的大學校園生活給我的人生賦予無限的亮點。使自己的知識水平、思想境界、工作能力等方面都邁上了一個新的臺階。在這即將告別美好大學生活、踏上社會征途的時候,我將以飽滿的熱情、堅定的信心、高度的責任感去迎接新的挑戰,攀登新的高峰。
畢業生個人登記自我鑒定
光陰似箭,轉眼大學生活即將過去了,本人從進入××大學××系××班級學習以來,一直以嚴謹的學習態度和積極的工作熱情投身于學習和工作中,雖然有過成功的喜悅,也有過失敗的辛酸,然后日益激烈的社會競爭也使我充分認識到,若想成為一名德智體全面發展的優秀大學生,這些鍛煉都是很基礎的和必要的。大學時期的所學、所感、所悟將指導我一生受用!
在政治上,我有堅定的政治方向,積極上進,熱愛祖國,熱愛人民,堅決擁護中國共-產-黨的領導,擁護黨的各項方針政策,遵紀守法,勇于批評和自我批評,樹立了正確的人生觀和價值觀。
在學習上,憑著對知識的渴望和追求,我一向嚴于律己,刻苦鉆研,勤奮好學,態度端正,目標明確,為把自己,變成一個掌握現代信息和職業技能的合格×××,我牢固掌握了本專業的基礎知識和技能,除此之外我還廣泛獵取其他學科的知識,給自己更多的機會參加社會實踐,做到理論聯系實際。
在工作上,除了積極參加學校、系、班級組織的各項活動外,結合自身特長,我還積極參加學校、社會組織的各種網絡設計比賽,并獲得獎勵,為學校爭光,得到了學校、老師和同學們的認可。
在生活上,養成了良好的生活習慣,生活充實而有條理,有嚴謹的生活態度,良好的生活作風;為人熱情大方,誠實守信,樂于助人。有自己為人處世的原則,與同學,朋友和睦相處,共同進步。
在體育方面,認真參加、學習學校開設的體育課程并圓滿完成任務,積極參加各項課外活動,并不斷豐富自己的閱歷。
×年的大學生活,使自己的知識水平、思想境界、工作能力都邁上了一個新的臺階。在這即將告別美好大學生活、踏上社會征途的時刻,我將以飽滿的熱情、堅定的信念、高度的責任感去迎接新的挑戰,攀登新的高峰。
畢業生登記表個人鑒定
轉眼間大學生生活就要結束了,離校之前,為了明確自己的過去與未來.我覺得我有必要對這幾年的大學生活做個自我鑒定!
大學期間,我不僅重視對專業課程和第二外語(日語)的學習,掌握了扎實的專業知識技能,同時注重個人思想道德品格和修養的提升,堅信“先做人后做事”的至理名言,認為正直的人格是人才的一項重要標準.
我性格開朗,亦靜亦動,本著一顆誠心與人交往,有較強的表達能力,同時也很樂意傾聽,懂得自我反省.我品嘗過失敗,經歷過迷惘,但最終在集體生活中慢慢成長起來,形成了良好的性格品質.
[關鍵詞]船機裝配;仿真裝置;開發
[DOI]1013939/jcnkizgsc201537053
1引言
本課題是大學生實踐創新訓練項目。大學生參加實踐創新訓練項目,可以鼓勵和支持大學生盡早參與科學研究、技術開發和社會實踐等創新活動,提高大學生的科學、文化素養,培養大學生的創新精神、創業精神和實踐能力。江蘇海事職業技術學院已籌備開展《船機裝配工》中級職業技能訓練鑒定,還需要加強《船機裝配工》實訓硬件建設,通過大學生實踐創新訓練項目,自主開發船機裝配實訓教學仿真裝置,即船舶主推進仿真裝置;測定船舶軸系理論中心線裝置,應用于《船機裝配工》中級職業技能訓練鑒定,即強化“雙證書”人才培養模式,實現“理實一體化”教學方式,提升學生的實踐創新能力。
2船舶主推進仿真裝置開發方案
21船舶主推進仿真裝置主要組成
船舶主推進仿真裝置,即十字頭式柴油機仿真裝置、船舶軸系仿真裝置,構成船舶主機與軸系主推進仿真裝置。
22船舶主推進仿真裝置總體結構
船舶主推進仿真裝置裝配圖,如圖1所示:
23船舶主推進仿真裝置材質
(1)十字頭式柴油機仿真裝置材質:鋁材、塑料。
(2)船舶軸系仿真裝置材質:鋁材、塑料。
24船舶主推進仿真裝置主要零部件配置
船舶主推進仿真裝置主要零部件配置,如下表所示。
25開發的船舶主推進仿真裝置實物圖
開發的船舶主推進仿真裝置實物,如圖2所示。
26船舶主推進仿真裝置功能
(1)裝置具有仿真大型低速柴油機與軸系的船舶主推進裝置,能直觀認識船舶主機與軸系總體結構、工作原理、特性;
船舶主推進仿真裝置主要零部件配置
(2)能模擬軸系安裝、校中;
(3)按裝配技術要求,能對裝置進行裝配調整及性能調試的操作技能訓練。
3測定船舶軸系理論中心線裝置開發
船舶建造和軸系修理時,均有軸系安裝和軸系校中工作,軸系的安裝和校中的質量直接關系到主機推進系統安裝的可靠性和船舶航行的安全性。軸系的安裝與校中都是以軸系理論中心線為依據的。軸系的理論中心線是船舶設計時確定的軸系中心線,工作實際中,在軸系安裝前,必須測量確定軸系理論中心線位置,所以開發的測定軸系理論中心線裝置,即是用于模擬工作實際測量船舶軸系理論中心線的。
設計制作的模擬測定船舶軸系理論中心線的裝置,裝置實物如圖3所示。
圖3測定軸系理論中心線的裝置
該裝置功能:模擬測定船舶軸系理論中心線。該裝置加強了實訓室硬件建設,開創了學生船舶軸系安裝測定軸系理論中心線實訓項目,完善學生知識結構,提升學生軸系安裝的理論知識與操作技能,提升了學生實踐應用技能。
4結論
開發的船舶主推進仿真裝置以及測定船舶軸系理論中心線裝置,應用于《船機裝配工》中級職業技能訓練鑒定、拓展實訓項目,有助于完善學生知識結構,使學生適應實踐崗位的技能要求,提升了“理實一體化”教學的成效。并且通過設計制作,培養學生生產設計開發能力,訓練了學生的機械產品制造實踐技能,提升了學生的科技創新能力。
參考文獻:
[1]吳東杰主推進裝置優化設計及仿真研究[D].武漢:武漢理工大學,2012
[2]孫樹德船舶軸系校中狀態及軸心軌跡的研究[D].大連:大連海事大學,2010
[3]馮志敏,王炳輝,蒲龍云,等船舶模擬推進裝置的結構設計及其試驗研究[J].內燃機工程,2003(3):4-8
在學習上, 在這一年里,先后取得了普通話水平測試證書和職業技能鑒定證書,這對我今后的工作有很大的幫助。承擔創新課題一個,并順利結題,這也是對我綜合能力的肯定。學習成績也比去年有了一定的進步。
在生活上,我獨立自主,養成良好習慣,并樂助人,關心他人,與舍友、同班同學保持良好的關系。并結識一些高年級的學長,向其請教學習、工作、生活上的問題。
在工作上,積極主動,工作踏實,責任心強,具有良好的組織交際能力,注重團隊協作精神,組織協調其他學生干部順利的完成各項工作。
我個人認為自己最大的缺點就是喜歡一心兩用甚至多用。急功近利,喜歡一口氣學許多東西,但是貪多嚼不爛,即使最后都能學會,也已經搞得自己很疲勞。如今想想,這樣其實并不好,正所謂貴在精而不在廣。自從發現這個缺點后,我常常警戒自己,以后一定改正。
三年的大學生活,使自己的知識水平、思想境界、工作能力等方面都邁上了一個新的臺階。在這即將揮手告別美好大學生活,踏上社會征途的時候,我整軍待發,將以飽滿的熱情、堅定的信心、高度的責任感投入到新的生活環境中,去迎接新的挑戰,攀登新的高峰。
大三學生自我鑒定范文二:大三的學生最近幾天開始寫學籍和畢業生登記表,其中有一項是畢業生自我鑒定,在把學籍發到同學們手里之前,我就強調讓大家把自己的自我鑒定先打個草稿,認真仔細的把自己三年來的在各方面取得的成績好好的總結一下,然在在寫到自己的學籍里面,這樣做的目的一是怕學生們直接寫到學籍里會出現涂改現象,第二擔心他們自己的鑒定寫不好,看似小小的鑒定卻會影響著他們的一生,強調歸強調依然會有學生的自我鑒定只有兩三行,難道大學三年真的沒有什么可寫的嗎?下面是一個學生寫的自我鑒定的一個范文,供大家參考: 驀然回首, 不知不覺中自己的求學生涯已經結束,給自己一個很好的定位,是對未來的憧憬和希望。
本人始終以提高自身的綜合素質為目標,以自我的全面發展為努力方向,樹立了正確的人生觀,價值觀和世界觀,但更多的是在這期間我學到了許多書本上學不到的知識,修養和能力,也使我的修養、為人處事能力以及交際能力等都有了質的飛躍;讓我懂得了除學習以外的個人處事能力的重要性和交際能力的必要性。
在校期間學習刻苦努力,積極參加學校組織的各項活動,團結同學,有耐心,樂于幫助他人,深受老師和同學的好評!為適應社會發展的需求,我認真學習各種專業知識,發揮自己的特長;挖掘自身的潛力,結合每年的暑期社會實踐機會,從而逐步提高了自己的學習能力和分析處理問題的能力以及一定的協調組織和管理能力。
在思想上我領悟到與其說品德是個人的人品操行,不如說是個人對整個社會的責任。一個人活在這個世界上,就得對社會負起一定的責任義務,有了高尚的品德,就能正確認識自己所負的責任,在貢獻中實現自身的價值。
在生活中,本人樸素節儉、性格開朗,嚴以律待人。平時善于和同學溝通,也樂于幫助同學,所以很多同學不管生活上還是思想方面有了困難也愿意尋求我幫助。在生活中建立了良好的人際關系,獲得大家的尊重和支持。
【關鍵詞】新時代;大學生;自我教育
中圖分類號:G64 文獻標識碼:A 文章編號:1006-0278(2014)07-209-01
自我教育法是思想政治教育的傳統方法之一,也是大學生思想政治教育的主要環節和重要方法,對增強大學生思想政治教育的效果有著重要意義。
一、自我教育法的發展
(一)古代的自我教育法
我國古代的德育思想理論主要是以儒家思想為基礎的,儒家德育思想是我國傳統德育思想的主流。而儒家的自我教育思想是儒家德育思想的重要內容。儒家先賢以自己對人性的深刻理解和洞察,對道德自我教育進行了闡發,形成了一整套較為系統的自我教育方法。儒家自我教育思想發端于儒家的心性之學。從孔子開始儒家就主張德性發乎人的內心、基于人的本性。
從孔子到宋明理學,儒家心性之學關注的核心是人自身內心的教化,反映了儒家對主體自我的肯定,體現了儒家對個體內心精神世界的關切。這意味著儒家道德教育的價值取向是強調自我內心的一種“定力”,主張在人的內心中尋找善惡美丑的標準,訴求的首先是人的“自律”而不是“他律”。這就為儒家道德自我教育思想奠定了理論基礎。
(二)新時期下的大學生自我教育法
理論要隨著實踐的發展而不斷地豐富自身。改革開放以來,社會的進步、環境的變遷、思想政治教育實踐活動的拓展以及新時期大學生的新變化都對大學生思想政治教育中自我教育法的運用提出了新要求。然而,當今的教育研究只是注意探討教育如何激發學生的方法,往往不去研究如何使學生掌握自我激發的方法。
大學生思想政治教育只有在大學生有了自我教育的要求,即有了充分的自覺性時才是有效的。促進大學生自我教育的因素有二:一是外界影響,即是社會和家庭、學校的要求。二是內在要求,是指大學生自身對物質和精神的要求。因此,教師運用這個方法時,要激越大學生的進取心,要提出對其品行的具體要求,要指出大學生的缺點和弱點,使大學生有針對性地進行自我教育。
美國教育家杜威對自我教育的倡導和研究確立了教育史上又一里程碑,他的“表先個性、培養個性、反對從上而下的灌輸“成為合理的自我教育的基本原則。教育和自我教育是傳承人類文化的兩種途徑與手段。在進入知識經濟時代的今天,大學生自我教育的重要性愈加凸現,因此對自我教育的研究與剖析將有助于高校對教育的重新思考。
二、大學生進行自我教育的可能性
(一)大學生思想政治教育中自我教育的內涵
湯秀云認為,“自我教育是人們為了自己的思想進步而進行的自覺的思想轉化和行為控制的活動。”。蘭剛認為,“自我教育,就是以自我價值判斷為標準,在原有觀念和價值圖式的基礎上,對外來信息進行反應所形成的品質的過程。”。
顧名思義,大學生的自我教育法是大學生按照學校思想政治教育的目標和要求,主動提高自身思想認識和道德水平以及自覺改正自己錯誤思想和行為的方法。這種教育方法,是通過大學生自身思想的矛盾運動開展的,也是大學生自覺接受先進思想和正確行為,克服錯誤思想和不良行為,促使自己的政治傾向和思想品德向良好的方向轉化、發展的教育方法。
(二)大學生進行自我教育的可能性
進入大學的青少年年齡基本上在18歲,這個年齡階段的青少年在身體和心理方面都發生了顯著變化,例如身體發育已經成熟,機能基本成人化;隨著年齡的增長,邏輯思維發達,越來越富于獨立性、批判性;情感豐厚奔放,文飾性與開放性并存;自我意識增強,獨立意向顯著;富有遠大理想,注重面對實際;世界觀趨于成熟,可塑性依然存在。大學生的這些身心上的變化,為其進行自我教育提供了可能性。
三、新時期大學生自我教育的方法
第一,自我修養。所謂自我修養,就是大學生在其思想、道德、政治以及知識等方面進行自我教育和自我鍛煉,以及由此而達到的一定程度和水平。大學生可以通過反省、反思來提高自我修養水平。
第二,自我總結。大學生在學校里每天的生活豐富多彩,因此,大學生要善于每天進行總結,在總結中發現自己近期在思想、道德、政治和學習上的進步與不足。通過自我總結,提高和完善自身的反思能力。
本人性格開朗,待人熱情大方,具有良好的口頭表達能力,善于與他人交際,有一定的組織、管理能力,工作細心、大膽、能夠積極的思考、創新。本人在大學期間,一直擔任班團支書,系學生會干事,后工作積極,擔任院學生會勤工助學部部長,并在學校創辦了市場營銷協會兼任會長,對于以后工作的規劃,5年內實現財富自由,10年后希望可以創辦屬于自己的公司‘
對事物有敏銳的洞察力;能很好得與人溝通,具有團隊合作精神;對負責的工作會付出全部精力和熱情,制定縝密計劃,力爭在最短時間內將目標達成;喜歡挑戰,能在較短時間內適應高壓力的工作。
畢業后進入企事業單位從事管理方面的工作,同時增加自己有關企業管理方面的經驗,在企業里面認真工作,通過自己的努力及領導的幫助指導,爭取在五年內做到中層以上的一名管理人員。
我雖然沒有什么社會經驗,但我能吃苦耐勞,我曾在高中有兩個暑假到酒店打工,也在那洗過碗,而且我很有上進心,只要自己想做的事,從來沒有做不到的,請相信我,我敢保證,選我是你們永不后悔的選擇。
學會自立、勤奮努力,認真對待學習,掌握扎實的專業技能知識,有較強的適應力和學習能力。為了積累經驗,做事積極主動,能很好地與人交流溝通,有強烈的團隊合作精神和服務精神。
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