內(nèi)部認(rèn)購精選(九篇)

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第1篇：內(nèi)部認(rèn)購范文

1.1企業(yè)建設(shè)缺乏以人為本的觀念

企業(yè)建設(shè)中，企業(yè)文化是促進(jìn)企業(yè)發(fā)展的重要內(nèi)容，人力資源管理沒有從真正意義上對專業(yè)人才管理引起重視，無法明確“以人為本”的企業(yè)文化理念，以企業(yè)領(lǐng)導(dǎo)決策為主，忽視了盡量保持企業(yè)領(lǐng)導(dǎo)層與內(nèi)部員工層的平等，導(dǎo)致一些階級觀念的出現(xiàn)，不利于企業(yè)全體員工之間的團(tuán)結(jié)協(xié)作，難以形成企業(yè)和諧的共同進(jìn)步。

1.2企業(yè)人力資源管理機(jī)制有待完善

當(dāng)前，很多煤炭企業(yè)的人力資源管理一直沿用傳統(tǒng)的管理機(jī)制和理念，沒有將人力資源管理進(jìn)行全面詮釋，只是簡單進(jìn)行人才的配置管理，并沒有對人才進(jìn)行充分的重視利用，缺少專業(yè)素質(zhì)的激勵和培養(yǎng)，局限人才的價值發(fā)揮，造成不必要的人力資源浪費(fèi)。管理機(jī)制的不完善，無法調(diào)動員工的工作積極性，不利于企業(yè)的發(fā)展。在人才配置上，受到傳統(tǒng)思想觀念的影響，沒有根據(jù)人才素質(zhì)特點(diǎn)與企業(yè)崗位需求進(jìn)行匹配，錄用的技術(shù)人才的水平不高，企業(yè)需要的高素質(zhì)復(fù)合型人才更是屈指可數(shù)，人力資源規(guī)劃和配置的不全面導(dǎo)致企業(yè)整體水平一般，不利于企業(yè)的長期發(fā)展。

1.3企業(yè)薪酬分配機(jī)制缺少創(chuàng)新

很多的煤炭企業(yè)在進(jìn)行薪酬計(jì)算時，都采用定崗定薪制，這種薪酬核算的方式容易導(dǎo)致一些不好的現(xiàn)象出現(xiàn)，例如看人定薪、看學(xué)歷定薪等，不利于員工實(shí)際價值的體現(xiàn)。另外，缺乏績效考核機(jī)制的創(chuàng)新，企業(yè)評價員工的績效沒有制定規(guī)范的標(biāo)準(zhǔn)，主觀地根據(jù)印象或經(jīng)驗(yàn)表現(xiàn)進(jìn)行績效考核，還可能出現(xiàn)績效多少和員工與領(lǐng)導(dǎo)的關(guān)系有關(guān)等現(xiàn)象，不利于對企業(yè)員工的激勵，也無法實(shí)現(xiàn)績效考核的真正目的。

2人力資源管理的重要性

首先，企業(yè)人才管理方面。人力資源管理可以實(shí)現(xiàn)人才的合理分配、利用和管理，維護(hù)企業(yè)內(nèi)部員工之間的關(guān)系，促進(jìn)彼此的溝通和交流，保證企業(yè)人才的價值充分發(fā)揮效果。其次，企業(yè)人才績效方面。科學(xué)的人力資源管理可以創(chuàng)造良好的企業(yè)氛圍，合理安排人力資源，保證人才價值得以實(shí)現(xiàn)，還能促進(jìn)員工的積極開拓創(chuàng)造性，不斷提升工作效率，實(shí)現(xiàn)個人績效的提高。最后，企業(yè)發(fā)展方面。企業(yè)的發(fā)展離不開人才的貢獻(xiàn)，科學(xué)的人力資源管理會完善優(yōu)秀的組織體系，通過恰當(dāng)?shù)膯T工布置，提供員工創(chuàng)造價值的平臺，共同協(xié)作，可以為企業(yè)創(chuàng)造巨大的財富，促進(jìn)煤炭企業(yè)可持續(xù)發(fā)展。

3煤炭企業(yè)人力資源管理的改進(jìn)措施

3.1重視企業(yè)文化建設(shè)理念

企業(yè)文化建設(shè)是企業(yè)發(fā)展的價值觀體現(xiàn)，對員工的行為和思想都有良好的指導(dǎo)和規(guī)范作用，將“以人為本”的理念加以重視，通過加強(qiáng)宣講，將人本思想在企業(yè)內(nèi)部進(jìn)行有效灌輸，將理論思想運(yùn)用到企業(yè)發(fā)展的建設(shè)中。只有加強(qiáng)人本思想建設(shè)，企業(yè)才能營造一種和諧、友好、團(tuán)結(jié)的文化氛圍，不斷培養(yǎng)、完善企業(yè)員工的基礎(chǔ)意識，尊重員工的思想和態(tài)度，將企業(yè)團(tuán)隊(duì)意識、協(xié)作意識進(jìn)行關(guān)注，充分發(fā)揮企業(yè)對人才的重視和培養(yǎng)，在人力資源管理的幫助下，讓員工更好的為企業(yè)創(chuàng)造發(fā)展。

3.2創(chuàng)新并完善企業(yè)人力資源管理模式

人力資源的管理制度要進(jìn)行創(chuàng)新，要摒棄傳統(tǒng)的管理模式，順應(yīng)社會發(fā)展的需求，提高企業(yè)管理的辦事效率。在人才的錄用方面，煤炭企業(yè)要樹立公平公正的招聘選拔機(jī)制，嚴(yán)格根據(jù)企業(yè)實(shí)際需要，擴(kuò)大招聘渠道，不斷選拔更多綜合型技術(shù)人才為企業(yè)所用，保證企業(yè)人力資源的充沛。另外，加強(qiáng)企業(yè)內(nèi)部現(xiàn)有技術(shù)人員的培訓(xùn)和教育提升工作，通過舉辦各種學(xué)習(xí)交流會、技術(shù)培訓(xùn)等，完善企業(yè)技術(shù)人員的素質(zhì)與技術(shù)，壯大企業(yè)人才建設(shè)隊(duì)伍，為企業(yè)的進(jìn)步和發(fā)展創(chuàng)造可靠保障。在進(jìn)行企業(yè)人力資源規(guī)劃時，要綜合考慮企業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀，判斷企業(yè)需要的技術(shù)人才，合理配置崗位需求，實(shí)現(xiàn)技術(shù)人才的價值，制定具有戰(zhàn)略發(fā)展意識的長久規(guī)劃，為保障企業(yè)可持續(xù)發(fā)展而進(jìn)行人力資源儲備和管理。

3.3加強(qiáng)人力資源管理的考核以及薪資結(jié)算機(jī)制

煤炭企業(yè)的績效考核要以保障技術(shù)人員的基本利益、不斷實(shí)現(xiàn)自我提升和突破為前提，制定公平、公正、標(biāo)準(zhǔn)的考核機(jī)制以及有發(fā)展性的薪酬結(jié)算機(jī)制，激勵員工積極、自主地創(chuàng)造績效，也要制定相應(yīng)的處罰規(guī)則，監(jiān)督員工的工作效率，實(shí)現(xiàn)企業(yè)員工的共同進(jìn)步，避免不求上進(jìn)。創(chuàng)新企業(yè)薪資結(jié)算機(jī)制，在公平、公正的基礎(chǔ)上，按照崗位和技能的不同制定薪資分配標(biāo)準(zhǔn)，拓展多元化的薪資待遇，對員工的福利方面要有相應(yīng)的保障，如醫(yī)療、保險等，激勵員工向上，創(chuàng)造更多的企業(yè)效益。

3.4健全企業(yè)人才培訓(xùn)體系

要加強(qiáng)企業(yè)的人才競爭實(shí)力，就要不斷健全企業(yè)的人才培訓(xùn)體系。企業(yè)培訓(xùn)機(jī)制不僅僅是要對技術(shù)人員的實(shí)際操作和理論知識進(jìn)行培訓(xùn)，還要從日常生活中注重人才能力狀態(tài)的了解，培訓(xùn)內(nèi)容要進(jìn)行針對性的設(shè)計(jì)，根據(jù)員工不同的水平狀態(tài)和學(xué)習(xí)能力進(jìn)行不同的教學(xué)培訓(xùn)課件的制定，保證培訓(xùn)機(jī)制的多樣性，真正實(shí)現(xiàn)培訓(xùn)的價值。另外，要不斷注重人才能力的培養(yǎng)和重視，避免人才的流失，增強(qiáng)企業(yè)綜合實(shí)力。

4結(jié)束語

第2篇：內(nèi)部認(rèn)購范文

[關(guān)鍵詞] 法人治理結(jié)構(gòu) 內(nèi)部審計(jì)

一、法人治理結(jié)構(gòu)的概念和組成

公司作為法人，需要有相適應(yīng)的組織體制和管理機(jī)構(gòu)，使之具有決策能力、管理能力，行使權(quán)利，承擔(dān)責(zé)任。這種體制和機(jī)構(gòu)被稱為法人治理結(jié)構(gòu)，也可以稱之為公司內(nèi)部管理體制。這種結(jié)構(gòu)使公司法人能有效的活動起來，因而很重要，是公司制度的核心。按照《公司法》規(guī)定，法人治理結(jié)構(gòu)有四個部分組成：

1.股東會或股東大會，由公司股東組成，所體現(xiàn)的是所有者對公司的最終所有權(quán)；

2.董事會，由公司股東大會選舉產(chǎn)生，對公司的發(fā)展目標(biāo)和重大經(jīng)營活動作出決策，維護(hù)出資人的權(quán)益；

3.監(jiān)事會，是公司的監(jiān)督機(jī)構(gòu)，對公司的財務(wù)、董事和經(jīng)營者的行為發(fā)揮監(jiān)督作用；

4.經(jīng)理，由董事會聘任，是經(jīng)營者、執(zhí)行者。

二、我國法人治理結(jié)構(gòu)的缺陷

1.股東大會職權(quán)流于形式

《公司法》規(guī)定了股東大會是公司最高的權(quán)力機(jī)構(gòu)，并列舉了11項(xiàng)職權(quán)。但實(shí)際權(quán)力往往操縱在董事會和經(jīng)營管理者手中。這主要源于兩點(diǎn)：第一，隨著公司股權(quán)結(jié)構(gòu)的高度分散化，股份公司特別是上市的股份公司的大部分股權(quán)仍由政府持有，國有股和法人股占了全部股權(quán)的絕大部分，股權(quán)結(jié)構(gòu)失衡。第二，公司經(jīng)營活動的日益專業(yè)化和復(fù)雜化，更加需要專業(yè)人員進(jìn)行決策和組織經(jīng)營活動。為了不降低效率，利于公司對市場機(jī)遇做出敏捷反應(yīng)，在公司組織機(jī)構(gòu)的權(quán)力分配上，經(jīng)營決策權(quán)逐漸轉(zhuǎn)移至董事會。

2.經(jīng)理階層職權(quán)膨脹，缺乏健全的人力資本激勵機(jī)制

公司經(jīng)理是是由董事會聘任的，經(jīng)理階層在生產(chǎn)經(jīng)營中往往享有比董事會更具體，更廣泛的權(quán)利。因此高級經(jīng)理人員的好壞決定了公司的成敗。從經(jīng)理人員的角度看，如果他們的薪酬只是基本工資和對已完成業(yè)績的年度獎勵，他們勢必只追求短期的利益，若要使其為公司長遠(yuǎn)發(fā)展考慮，就必須有相應(yīng)的激勵手段。而現(xiàn)在的經(jīng)理薪酬制度，要么不能恰當(dāng)?shù)毓烙?jì)和確認(rèn)經(jīng)理人員的貢獻(xiàn)引發(fā)優(yōu)秀企業(yè)家流失現(xiàn)象，要么經(jīng)營者自定高額薪酬，經(jīng)理人員實(shí)行自我激勵。在企業(yè)產(chǎn)權(quán)缺位的情況下，這樣易造成把國有資產(chǎn)無償量化給個人等損害小股東利益的行為。

3.監(jiān)事會監(jiān)督職能不能到位

隨著公司規(guī)模和公開程度不斷擴(kuò)大，監(jiān)事會職權(quán)的重要性也日益遞增。雖然我國《公司法》規(guī)定了監(jiān)事會擁有對董事和經(jīng)理違法行為的制止權(quán)和提議召開臨時股東大會的權(quán)利，但沒有創(chuàng)設(shè)監(jiān)事會履行職責(zé)的程序性保障機(jī)制，《公司法》也沒有作進(jìn)一步的規(guī)定。監(jiān)督流于形式缺乏力度和威懾力，難以對董事會和經(jīng)理層形成有效的監(jiān)督制約。

因此要完善我國的公司治理結(jié)構(gòu)，應(yīng)當(dāng)處理好股東大會、董事會、監(jiān)事會和高級管理層的機(jī)構(gòu)設(shè)置和職能界限。而加強(qiáng)公司內(nèi)部審計(jì)工作，無疑會完善風(fēng)險管理和內(nèi)部控制機(jī)制，強(qiáng)化資本約束，建立有效的法人治理結(jié)構(gòu)。

三、內(nèi)部審計(jì)的定義和強(qiáng)化措施

1.內(nèi)部審計(jì)的概念

內(nèi)部審計(jì)是一項(xiàng)獨(dú)立、客觀的保證和咨詢活動，它通過系統(tǒng)化和規(guī)范化的方法、評價和改進(jìn)風(fēng)險管理、控制的有效性，幫助組織實(shí)現(xiàn)目標(biāo)。由于內(nèi)部審計(jì)人員熟悉企業(yè)經(jīng)營環(huán)境并了解企業(yè)經(jīng)濟(jì)活動及過程。有效的內(nèi)部審計(jì)可以充分發(fā)揮強(qiáng)有力的監(jiān)督功能，達(dá)到完善法人治理結(jié)構(gòu)的目的，保證企業(yè)整體利益的實(shí)現(xiàn)。

2.強(qiáng)化內(nèi)部審計(jì)的策略

(1)轉(zhuǎn)變觀念提高認(rèn)識，加強(qiáng)內(nèi)部審計(jì)工作。作為企業(yè)高層領(lǐng)導(dǎo)應(yīng)從管理的角度充分認(rèn)識到內(nèi)部審計(jì)在企業(yè)管理中的重要性，為內(nèi)部審計(jì)配置適宜的人力、技術(shù)、資源，提高內(nèi)部審計(jì)機(jī)構(gòu)和內(nèi)部審計(jì)人員的地位，充分調(diào)動內(nèi)部審計(jì)人員的工作熱情。作為內(nèi)部審計(jì)部門，也應(yīng)按照高級管理層和董事會所確定的政策認(rèn)真履行其職責(zé)。及時將審計(jì)中發(fā)現(xiàn)的經(jīng)營管理中存在的薄弱環(huán)節(jié)向直接領(lǐng)導(dǎo)匯報，并提出合理化建議，從而贏得企業(yè)管理當(dāng)局的重視和信賴，以保障審計(jì)權(quán)利和職責(zé)的有效執(zhí)行。

(2)保障企業(yè)內(nèi)部審計(jì)的獨(dú)立性。要使內(nèi)部審計(jì)真正起到監(jiān)督經(jīng)營者資本營運(yùn)、維護(hù)資產(chǎn)安全完整、達(dá)到協(xié)助管理當(dāng)局有效地履行職責(zé)和責(zé)任，就必須明確產(chǎn)權(quán)主體，建立產(chǎn)權(quán)監(jiān)督體制，將內(nèi)部審計(jì)置于產(chǎn)權(quán)主體的領(lǐng)導(dǎo)之下，代表產(chǎn)權(quán)主體的利益進(jìn)行工作，增強(qiáng)內(nèi)部審計(jì)的權(quán)威性、獨(dú)立性，改變以往內(nèi)審無力的現(xiàn)象。當(dāng)前世界各國設(shè)置的內(nèi)部審計(jì)機(jī)構(gòu)的組織模式中以董事會領(lǐng)導(dǎo)型、監(jiān)事會領(lǐng)導(dǎo)型的內(nèi)部審計(jì)機(jī)構(gòu)，相對來說有較強(qiáng)的獨(dú)立性和權(quán)威性，為現(xiàn)代企業(yè)內(nèi)部審計(jì)較為理想的機(jī)構(gòu)模式。

(3)加強(qiáng)企業(yè)內(nèi)部審計(jì)人員隊(duì)伍建設(shè)，不斷提高企業(yè)內(nèi)部審計(jì)人員的素質(zhì)。要將實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)豐富、業(yè)務(wù)水平較高的人員充實(shí)到內(nèi)部審計(jì)隊(duì)伍中。加強(qiáng)對內(nèi)審人員的后續(xù)教育工作，使內(nèi)審人員及時更新知識，掌握新的技能和方法，使企業(yè)內(nèi)審人員成為既懂財務(wù)會計(jì)、熟悉審計(jì)業(yè)務(wù)，又具備經(jīng)營管理、經(jīng)濟(jì)法律等各方面知識的復(fù)合型人才，從而建立一支知識結(jié)構(gòu)多元化、專業(yè)知識技能化、技術(shù)職稱資格化的企業(yè)內(nèi)部審計(jì)專業(yè)隊(duì)伍，提高企業(yè)內(nèi)部審計(jì)工作質(zhì)量。

隨著現(xiàn)代企業(yè)經(jīng)營管理水平的提高，企業(yè)內(nèi)部審計(jì)應(yīng)沖破制約作用的范圍，擴(kuò)展到促進(jìn)企業(yè)改善經(jīng)營管理和提高盈利水平等作用的方面，通過評價企業(yè)組織內(nèi)部的控制，揭示企業(yè)內(nèi)部存在的潛在風(fēng)險，完善公司治理結(jié)構(gòu)，確保企業(yè)高效地運(yùn)作和發(fā)展。

參考文獻(xiàn)：

[1]何軍:我國上市公司治理結(jié)構(gòu)存在的主要問題與法律對策.四川職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報,2006年第5期

[2]馬韶青:我國公司治理結(jié)構(gòu)的法律探討.六盤水師范專科學(xué)校學(xué)報,2007年第2期

第3篇：內(nèi)部認(rèn)購范文

關(guān)鍵詞：視知覺；空間；細(xì)部；色彩

Abstract:There is a correlative system within human, object and enviornment with the modern society's transition to pluralization. Architects ought to reconsider about all kinds of enviornments from humanistic point of view. We must re-explore the relationship between human and space and improve our works with a systemic viewpoint.

Keywords:visual perception； space； detail；color

中圖分類號：TU-80； U45

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1008-0422（2008）11-0101-02

1引言

建筑是視覺感知的藝術(shù)，建筑師在設(shè)計(jì)過程中，始終伴隨著視覺思維。大腦通過外界的光信號在人的視網(wǎng)膜上反映的顏色和色塊集合，知覺到排列有序的由分離物體組成的視覺世界形成了視知覺，各種不同的物體占據(jù)不同的位置，存在著相互作用或相對運(yùn)動。實(shí)體與周圍的關(guān)系，實(shí)體本身的形狀、質(zhì)感和色彩是產(chǎn)生視知覺的幾個主要方面。就建筑而言，從古至今，無論是東方還是西方，經(jīng)歷了許多的主義更替，回歸本質(zhì)，是建筑實(shí)體與外部空間的協(xié)調(diào)、內(nèi)部空間的平衡，建筑實(shí)體本身點(diǎn)、線、面等的細(xì)部勾勒和色彩及材料帶來的變化。

2新特點(diǎn)

新一輪上海市城市總體規(guī)劃提出構(gòu)筑國際大都市綜合交通體系，上海市城市交通白皮書提出構(gòu)筑國際大都市一體化交通，以優(yōu)質(zhì)、高效、整合的巨型交通體系，適應(yīng)不斷增長的交通需求，全面提升城市綜合競爭力。作為城市道路延伸的越江隧道亦為上海城市交通的一個組成部分，從最早的打浦路隧道至今，已經(jīng)歷了半個多世紀(jì)的發(fā)展。隨著現(xiàn)代主義潮流的到來，材料的不斷更新，建造技術(shù)的不斷發(fā)展，使得越江隧道不再以單一的連通上海黃浦江兩岸的交通功能為主了，以人為本的人性化思想滲透到生活的每個角落；怎樣最大限度地利用建筑手法通過對空間和細(xì)部等的處理來解決機(jī)動車在經(jīng)過越江隧道時所形成的單調(diào)、乏味的視覺感受亦成了新時期的新課題。

3簡述

隧道為狹長的圓形及方形管狀結(jié)構(gòu)，由相似的橫截面不斷地有序重復(fù)出現(xiàn)形成了隧道的三維空間。由此把隧道空間與人聯(lián)系起來的是人的視覺對其各個連續(xù)截面的空間尺度及其細(xì)部的感知。典型的越江隧道橫截面：其頂部為檢測電纜、照明及縱向通風(fēng)空間，上部為行車空間，下部主要為逃生及各管線穿越空間。撇去其下部，當(dāng)機(jī)動車以一定的速率經(jīng)過時，由頂部、側(cè)邊以及前方路面構(gòu)成了隧道的三維空間與機(jī)動車的行駛速度形成了司機(jī)的四維動態(tài)視知覺。因此要改變作為隧道客體的機(jī)動車司機(jī)的視覺感受，就要從隧道的空間、細(xì)部、材料的色彩和光感等著手。

4實(shí)例

4.1 簡介

南路越江隧道位于上海南浦大橋和盧浦大橋之間，主線北起浦西南路、中山南路路口；沿東南方向穿越黃浦江至浦東的高科西路、云蓮路口，隧道全長約2.67km。規(guī)劃為雙孔，每孔為單向雙車道，計(jì)算行車速度為40km/h，行車凈高為4.5m，凈寬為7.5m。

4.1設(shè)計(jì)的構(gòu)思要點(diǎn)

南路越江隧道是黃浦江上第八條隧道，位于世博園區(qū)規(guī)劃區(qū)域內(nèi)，作為2010年世博會期間連接浦江兩岸世博會場館的專用越江通道，將滿足園區(qū)內(nèi)每小時六到七萬人次的越江需求，世博會后將向社會開放。上海世博會將是探討人類城市生活的盛會，屆時南路越江隧道將作為盛會的主要迎賓廊之一。這條長廊將要介紹的是新技術(shù)、新概念，展現(xiàn)的是這個時代的速度感、科技感，營造是以人為本的切身感受。

4.1.1 空間

隧道內(nèi)部由兩種基本的空間組成：車行空間和功能空間，表現(xiàn)為豎向分層狀，其上、中、下部分別為縱向通風(fēng)空間、車行空間、管線通道；車行空間是人形成思維和活動的虛體空間，以車輛通行限界來描述，當(dāng)人置身于其中時，關(guān)注的是隧道的另外一個空間：即功能空間。“空間”的概念：源自于拉丁文的“spatium”“在日常三維場所的生活體驗(yàn)中、符合特定幾何環(huán)境的一組元素或地點(diǎn)；兩地點(diǎn)間的距離或特定邊界間的虛體區(qū)域”（見American Heritage詞典）。空間的感知涉及了空間的特定構(gòu)成方式，因此成就人在隧道內(nèi)的視覺感知，是那部分被結(jié)構(gòu)外殼和車輛限界限定了的功能空間中各流線、關(guān)系、尺度等的組織。南路隧道盾構(gòu)段的典型橫剖面，其上部空間由于特殊的圓形盾構(gòu)結(jié)構(gòu)，決定了其與結(jié)構(gòu)邊界形成的是拱頂狀，拱頂弧線頂點(diǎn)與車輛限界相距2m有余，成為各功能的必爭之地，南路隧道采用的是全新的橫向排煙與縱向通風(fēng)結(jié)合的形式，最初的方案是在頂部預(yù)留一部分空間作為橫向排煙通道，用預(yù)制鋼筋混凝土板相隔并作為行車空間的吊頂，每隔一定距離頂部開啟排煙百葉窗收集煙霧，再于混凝土板下剩余的功能空間中布置傳輸電纜、照明、監(jiān)控及通風(fēng)設(shè)備，隧道下部空間則作為管線通廊等；各功能各就其位，也提高了空間利用率，但卻忽視了最重要的車行空間中人的使用感受；早期的隧道由于拱頂耐火材料的限制，在其頂部加設(shè)預(yù)制混凝土板做為吊頂以保護(hù)的維護(hù)結(jié)構(gòu)，隨著拱頂耐火覆蓋材料的發(fā)展，對拱頂做了全新的布置，去掉了累贅的混凝土天花板；如今這道吊頂又回來了，使得有限的隧道內(nèi)部空間顯得局促狹小，違背了世界發(fā)展的客觀規(guī)律和以人為本的設(shè)計(jì)初衷。為了優(yōu)化人的視覺感受，經(jīng)過一系列研究和探討，對隧道橫截面各功能空間做了新的排列組合，把原先位于頂部的排煙通道移至隧道下部的一側(cè)空間，在不影響車輛限界的前提下，通過側(cè)邊引至頂部的通風(fēng)管道收集火災(zāi)工況下積聚在頂部的大量煙霧，整合下部以傳輸為主的各功能管線，緊湊的布置在隧道下部的另外一側(cè)空間，而拱頂部分的功能空間僅有序設(shè)置一些必要的設(shè)備，這樣一來，立即改變了原本比較壓抑的寬扁型隧道內(nèi)部空間的心里感受，給人帶來比例和諧的寬敞型視覺享受。

4.1.2細(xì)部

細(xì)部是建筑的生命：從構(gòu)件尺寸、結(jié)構(gòu)邏輯、材料肌理和質(zhì)感，到構(gòu)造細(xì)節(jié)的處理，都表達(dá)著其所構(gòu)成整體的情感、氣質(zhì)和內(nèi)涵。隧道內(nèi)部的細(xì)部不同于普通建筑，它不在于門、窗、入口、欄桿等的處理，從其斷面可以看出，從拱頂?shù)睦取⒄彰鳠簟?nèi)墻面……到防撞側(cè)石、底部的排水溝，其間每個設(shè)備每個功能構(gòu)造都是它的細(xì)部。由此可見，隧道內(nèi)部的細(xì)部是功能與結(jié)構(gòu)的聯(lián)接構(gòu)件，處于不同功能和結(jié)構(gòu)部位以及不同形態(tài)部位的連接處，呈水平狀向前延伸，而要改變它所包含的視覺信息，就要從這些“細(xì)枝末節(jié)”做起。

“希臘建筑如燦爛的、陽光照耀的白晝，伊斯蘭建筑如星光閃爍的黃昏，哥特建筑則像朝霞。”每種形式的細(xì)部語言賦予建筑不同的情感；對于現(xiàn)在，簡潔的處理手法、純凈的體型、新興的材料是這個時代建筑的主要特征，于是形成了運(yùn)用高技派和極少主義或者稱最簡單派藝術(shù)相結(jié)合的現(xiàn)代手法對隧道內(nèi)部細(xì)部進(jìn)行處理的想法。

高技派表述的是使工業(yè)結(jié)構(gòu)、工業(yè)構(gòu)造和機(jī)械部件具有的美學(xué)價值，突出當(dāng)代的技術(shù)特色，表達(dá)高科技是社會發(fā)展的動力；在隧道的拱頂，射流風(fēng)機(jī)、車道信號燈、檢測電纜、廣播喇叭等各種技術(shù)設(shè)備，不加遮攔的布置在結(jié)構(gòu)內(nèi)表面；正體現(xiàn)了高技派的特征，精細(xì)的拉桿、輕巧簡潔的鋼構(gòu)支起各種機(jī)械設(shè)備、數(shù)字信息面板，立時帶來具有機(jī)械美、高科技美的未來視覺感受。

隧道側(cè)壁的裝飾板是保護(hù)隧道側(cè)面結(jié)構(gòu)的重要構(gòu)造措施，它與司機(jī)的視線呈同一水平層，人的視知覺大部分都來自于它，同時為了保證隧道內(nèi)部交通順暢安全，減少司機(jī)的視覺干擾，提出了極少主義表皮的現(xiàn)代主義建筑手法。極少主義是現(xiàn)代主義的重要流派，是一件作品去掉非本質(zhì)元素，所有細(xì)節(jié)和連接濃縮至精華，所散發(fā)出來的完美感。于是，構(gòu)思了用鋁―鋅波形板作為隧道的防護(hù)裝飾板，鋁―鋅波形板不僅有優(yōu)異的諸多性能，而且具有華麗的表面；加上在鋁―鋅波形板中部局部穿孔，形成朦朧的光帶，隨著機(jī)動車的前進(jìn)，淡淡的光暈和波形板材重復(fù)的起伏形成不斷變換的視覺效果，既重復(fù)又絕不單調(diào)，將我們帶入探討未來的世博盛會。

4.1.3色彩與燈光

色彩的出現(xiàn)是由于光照射到物體上，物體對光不同反射的結(jié)果。物體本身固有的顏色，即物體色，光的色彩是光源色。物體的色彩是光源色和物體固有的顏色相互作用的結(jié)果。物體本身的質(zhì)感也影響著物體的色彩，比如物體表面的光滑和粗糙對光的吸收程度不同。

人生活在這彩色的世界里，不斷與自然融合、不斷改造自然，在這個過程中逐漸認(rèn)識色彩，發(fā)展到有意識地運(yùn)用色彩改造生活，建筑的發(fā)展也一直伴隨著色彩的應(yīng)用。

色彩令世界變得繽紛，影響著人們的心境，人在與色彩相遇的那一瞬間，意會到或平和、或熱誠、或清新…如何最終改造為人性化的隧道內(nèi)部空間，色彩和燈光是最后的點(diǎn)睛一筆。

隧道的色彩區(qū)域大致分為三塊：頂部、側(cè)壁及路面。

隧道的頂部對于司機(jī)來說是整體視覺的背景，采用無色彩的黑色防火涂料較適合；黑色為退色，就象夜空，給人以鎮(zhèn)靜、收縮、遙遠(yuǎn)的感覺，涂料表面粗糙，吸收較多光源，反射低，這樣給予了隧道內(nèi)部空間無限放大的錯覺，從而減少穿越隧道時的壓抑感。

隧道的側(cè)壁是司機(jī)的主要視覺區(qū)域，既不能降低照明也不能過于刺眼，因此微泛藍(lán)青的白色系列較為合適，當(dāng)燈光照在亮麗的銀白色金屬板上時，隱隱漫出的藍(lán)青色給人以干凈、透明、智慧的感受，激勵著人的情緒，有助于保持司機(jī)的注意力。

隧道的路面為司機(jī)指名去向，其視知覺取決于隧道內(nèi)部燈的照度在路面所形成的顯色指數(shù)。

第4篇：內(nèi)部認(rèn)購范文

關(guān)鍵詞：內(nèi)部營銷;人力資源管理;模型

一、內(nèi)部營銷的內(nèi)涵

內(nèi)部營銷的定義最早是由美國的Berry 和 Parasuraman兩位學(xué)者提出，兩人將市場營銷理論植入企業(yè)內(nèi)部的人員管理之中，認(rèn)為內(nèi)部營銷是一個內(nèi)部供應(yīng)者向內(nèi)部顧客提供完善服務(wù)方案的過程。[1]Geroge（1990）認(rèn)為這種哲學(xué)要求企業(yè)的管理者將雇員視為消費(fèi)者來滿足。[2]Berry 和 Parasuramen（1991）認(rèn)為這種營銷職能是設(shè)計(jì)出滿足雇員物質(zhì)和精神需求的工作產(chǎn)品使雇員可以從中得到滿足進(jìn)而更好的達(dá)成讓消費(fèi)者滿意的企業(yè)目標(biāo)。通過對以往內(nèi)部營銷內(nèi)涵回顧的分析可以看出，作為人力資源管理工具的內(nèi)部營銷，其理論的實(shí)質(zhì)就是用營銷的視角和觀點(diǎn)對企業(yè)內(nèi)部的員工進(jìn)行規(guī)范和管理，通過對STP策略和

4P策略等營銷策略的有效運(yùn)用來逐步提升企業(yè)內(nèi)部員工的滿意度和服務(wù)質(zhì)量進(jìn)而實(shí)現(xiàn)使消費(fèi)者滿意的企業(yè)目標(biāo)。

二、運(yùn)用內(nèi)部營銷理論指導(dǎo)人力資源管理工作的可行性

將內(nèi)部營銷理論引入到人力資源管理活動中的可行性有以下兩個方面：一方面企業(yè)之所以開展人力資源管理活動是為了挑選符合組織業(yè)務(wù)發(fā)展需要的人才，進(jìn)而提升他們工作的積極性的和潛能的發(fā)揮以實(shí)現(xiàn)企業(yè)利潤的獲得和目標(biāo)的達(dá)成，而內(nèi)部營銷的開展則是通過企業(yè)對員工讓渡價值的增加而和員工之間構(gòu)建起來的和諧長久的關(guān)系已達(dá)到企業(yè)做種目的的實(shí)現(xiàn)，兩者都是借助對員工管理和激勵的完善來實(shí)現(xiàn)企業(yè)的最終目標(biāo)的;另一方面人力資源管理職能整合需要借助內(nèi)部營銷的有效實(shí)施，這是因?yàn)閮?nèi)部營銷是在企業(yè)將員工視為內(nèi)部顧客基礎(chǔ)上將外部營銷理論應(yīng)用于企業(yè)內(nèi)部的經(jīng)營管理之中，由STP策略充分了解到內(nèi)部顧客的具體需求和潛在需求，再通過4P策略針對性的提升企業(yè)內(nèi)部顧客的滿意度，進(jìn)而解決人力資源管理中存在的各種問題。

三、服務(wù)業(yè)人力資源管理中存在的問題

（一）人崗不匹配現(xiàn)象導(dǎo)致企業(yè)冗員與缺員并存。有關(guān)服務(wù)業(yè)的準(zhǔn)確定義一直是國內(nèi)外學(xué)者熱議的話題，在查閱相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上本文認(rèn)為服務(wù)業(yè)是指生產(chǎn)和銷售服務(wù)產(chǎn)品的生產(chǎn)部門和企業(yè)的集合。在服務(wù)行業(yè)中員工在很大程度上影響著企業(yè)創(chuàng)造的經(jīng)濟(jì)效益，但在目前的企業(yè)當(dāng)中一線員工緊缺、二線員工松散、三線員工臃腫的現(xiàn)象比比皆是，這就要求企業(yè)將人力資源管理同企業(yè)的戰(zhàn)略目標(biāo)結(jié)合在一起，來為企業(yè)創(chuàng)造核心的競爭優(yōu)勢，但是由于企業(yè)的高級管理層缺乏對人力資源管理過程中整體規(guī)劃的有效掌控，使得公司對工作的管理呈現(xiàn)出混亂的狀態(tài)。與此同時，企業(yè)內(nèi)部的員工無法感知到組織對自身職業(yè)發(fā)展的關(guān)注和培養(yǎng)，認(rèn)為高層管理者僅僅是將雇員當(dāng)做企業(yè)獲得經(jīng)濟(jì)效益的工具，無法自發(fā)的形成對組織的歸屬感，因而造成職員的離職率逐年的升高，這一現(xiàn)象尤其體現(xiàn)在環(huán)境艱苦、壓力巨大的一線員工身上，員工滿意度的下滑直接或間接的導(dǎo)致企業(yè)服務(wù)質(zhì)量的下降，使之陷入服務(wù)失敗循環(huán)當(dāng)中。

（二）培訓(xùn)體系僵化，不能滿足員工需求。企業(yè)的經(jīng)營目標(biāo)是通過消費(fèi)者滿意度的提升獲取經(jīng)濟(jì)利益，因此其人力資源部門組織的員工培訓(xùn)都是以企業(yè)的任務(wù)為出發(fā)點(diǎn)，常常忽視員工個人職業(yè)發(fā)展和提升的需求。以此，企業(yè)以自身需求為出發(fā)點(diǎn)構(gòu)建的培訓(xùn)體系十分的不完善，培訓(xùn)課程的設(shè)計(jì)不僅不符合員工的實(shí)際需求，而且都是注重其帶給企業(yè)的短期經(jīng)濟(jì)效益，忽視了開發(fā)員工的潛能和團(tuán)隊(duì)、質(zhì)量、服務(wù)意識以及對他們思維和觀念的培訓(xùn)等服務(wù)行業(yè)內(nèi)員工所應(yīng)該具有的特質(zhì)。這種忽視企業(yè)內(nèi)部擁有技術(shù)專長潛能員工的開發(fā)，反而耗用更多的資源停留在員工短期崗位培訓(xùn)和一般管理理論知識的層面，使得企業(yè)無法使得自身的培訓(xùn)體系將組織內(nèi)部人力和資源等所有要素整合成一個有機(jī)體，構(gòu)建成一個完善的需求、培訓(xùn)和改進(jìn)的良好循環(huán)體，通過員工能力的不斷提升來打造企業(yè)的核心競爭能力。

（三）溝通不良導(dǎo)致企業(yè)內(nèi)部流動率低與員工離職率高并

存。企業(yè)的人力資源管理部門雖然從事的是有關(guān)人事的管理工作，但卻沒有將組織內(nèi)部的員工放在與外部顧客同等重要的位置，而是在將“事”作為企業(yè)經(jīng)營管理過程中核心部分的基礎(chǔ)上構(gòu)建一套強(qiáng)調(diào)工作任務(wù)重要程度的管理機(jī)制，不僅忽視組織中不同成員需求的差異性，而且缺乏渠道獲取和了解組織內(nèi)部成員的需求，因而擱置了對職員理解和溝通機(jī)制的構(gòu)建。這種傳統(tǒng)固有模式的不知變通不僅阻礙了組織成員流通意識的形成和流通通道的設(shè)立，而且因無法有效滿足組織內(nèi)部成員個性化的需求及通過制度、獎懲等手段束縛其發(fā)展而導(dǎo)致員工滿意度的降低，使得企業(yè)內(nèi)部員工的流通率極低且員工離職率呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢。

四、構(gòu)建服務(wù)業(yè)人力資源管理內(nèi)部營銷模型

（一）服務(wù)業(yè)人力資源管理中的 STP 策略。首先，企業(yè)的人力資源管理部門將內(nèi)部員工分成具有類似需求的多個群體，并將這些具有差異性的群體作為內(nèi)部營銷的對象;然后，內(nèi)部營銷的實(shí)施者在市場調(diào)研的基礎(chǔ)上對企業(yè)現(xiàn)有員工、潛在員工和離職員工進(jìn)行分析，歸納總結(jié)針對每組研究對象不同特征的具有客觀性和真實(shí)性的信息資料，并根據(jù)企業(yè)的發(fā)展目標(biāo)和整體資源情況選擇符合企業(yè)未來發(fā)展規(guī)劃的細(xì)分市場作為企業(yè)的主要市場;最后，企業(yè)的高層管理者要以企業(yè)發(fā)展的最終目標(biāo)和工作需要來對員工進(jìn)行一系列的選擇、培訓(xùn)和考核，使得不僅員工的能力足以符合工作崗位的要求，而且崗位的特征可以與員工的興趣相對應(yīng)，除此之外，企業(yè)文化和員工價值觀的一致性等也是十分重要的考略因素，這種人盡其才、人崗匹配的內(nèi)部市場定位策略在很大程度上滿足了內(nèi)部顧客的需求，同時也避免了造成企業(yè)資源的浪費(fèi)。

（二）服務(wù)業(yè)人力資源管理內(nèi)部營銷模式中的產(chǎn)品策略。企業(yè)將工作崗位和與之相關(guān)的各種利益結(jié)合體作為企業(yè)“銷售”給內(nèi)部顧客的產(chǎn)品，并根據(jù)內(nèi)部顧客需求的差異性設(shè)計(jì)和開發(fā)出薪酬產(chǎn)品、職業(yè)發(fā)展產(chǎn)品和企業(yè)文化產(chǎn)品等多種以追求顧客滿意的產(chǎn)品形式，如對于處于企業(yè)基層的員工應(yīng)該設(shè)計(jì)成成包含基本工資、績效薪酬、獎金和福利四個部分在內(nèi)的以薪酬為核心的體系，并且根據(jù)工作年限的長短分為收入具有彈性和較為穩(wěn)定兩種;針對企業(yè)的中層員工來說，他們追求的是個人工作方便的發(fā)展，因此以職業(yè)發(fā)展為核心的工作崗位設(shè)計(jì)可以激發(fā)他們對于工作的積極性和熱情;除以上兩種薪酬體系的設(shè)計(jì)外，企業(yè)文化對于員工的吸引力也是不容忽視的，當(dāng)員工的價值觀和企業(yè)愿景相符合時員工更容易自發(fā)的認(rèn)同和理解企業(yè)文化，因此以企業(yè)文化為核心的薪酬設(shè)計(jì)是十分必要的。

（三）服務(wù)業(yè)人力資源管理內(nèi)部營銷模式中的價格策略。企業(yè)的內(nèi)部營銷中，價格策略通常指的是“銷售”給內(nèi)部顧客產(chǎn)品的價格，即員工付出辛勞完成工作任務(wù)應(yīng)獲得的報酬，因此合理的薪酬體系的設(shè)計(jì)關(guān)系著員工工作的積極性和滿意度。其中，企業(yè)的內(nèi)部營銷一般有三種定價方法：成本導(dǎo)向定價指的是以員工的工作年限和經(jīng)驗(yàn)的豐富程度作為薪酬設(shè)計(jì)的制定依據(jù)，并根據(jù)員工對付出貢獻(xiàn)的多少對薪酬做出相應(yīng)的調(diào)整;顧客導(dǎo)向定價指的是以企業(yè)內(nèi)部顧客的感知價值為出發(fā)點(diǎn)將員工評判組織提品所具有的價值作為薪酬設(shè)計(jì)的參考依據(jù)，這要求企業(yè)事先調(diào)查和了解員工的各種需求和其對企業(yè)提品價值的感知度;競爭導(dǎo)向定價指的是以同一地區(qū)相同行業(yè)的薪酬設(shè)計(jì)作為定價的評判依據(jù)，企業(yè)可根據(jù)內(nèi)部人力資源需求緩急的程度或低或高于市場上的價格基準(zhǔn)從而進(jìn)行進(jìn)一步的控制和調(diào)整。

（四）服務(wù)業(yè)人力資源管理內(nèi)部營銷模式中的渠道策略。企業(yè)在實(shí)施內(nèi)部分銷策略時將其自身作為生產(chǎn)者，與此同時各個部門管理者作為生產(chǎn)者與內(nèi)部顧客之間的中間商，其中人力資源管理部門作為中間商，通過中間商在生產(chǎn)者和內(nèi)部顧客之間的調(diào)整和協(xié)助以最終實(shí)現(xiàn)將組織產(chǎn)品及相關(guān)信息傳達(dá)給內(nèi)部顧客的同時獲得反饋，這種溝通渠道的設(shè)計(jì)可以通過對各部門管理者的評估和激勵實(shí)現(xiàn)信息的有效溝通。針對企業(yè)在實(shí)施內(nèi)部營銷的過程中時常遇到障礙，為此企業(yè)應(yīng)該采用有效的激勵方式管理和敦促各部門負(fù)責(zé)人成為企業(yè)和員工之間稱職的渠道連接者，或是將這些渠道成員的行為通過評估標(biāo)準(zhǔn)的考核將結(jié)果與其薪酬掛鉤，使得中間商可以充分的發(fā)揮其在生產(chǎn)者和內(nèi)部顧客之間的連接作用，讓企業(yè)內(nèi)部營銷的渠道策略得以順利的實(shí)施。

（五）服務(wù)業(yè)人力資源管理內(nèi)部營銷模式中的促銷策略。企業(yè)作為內(nèi)部營銷的實(shí)施者一般通過溝通、培訓(xùn)、激勵、授權(quán)四種方式的有效運(yùn)用促使內(nèi)部顧客對企業(yè)提供的產(chǎn)品達(dá)到滿意。其中，溝通意在使企業(yè)、部門和員工相互之間通過多方位和多角度的不同的溝通渠道將重要信息充分有效的傳達(dá);培訓(xùn)的作用主要是將企業(yè)的內(nèi)部營銷思想和服務(wù)意識灌輸給組織內(nèi)部的員工，這不僅需要企業(yè)的培訓(xùn)內(nèi)容包括對工作技能和規(guī)范的相關(guān)培訓(xùn)，還要求對企業(yè)核心價值觀和內(nèi)部部門運(yùn)作等知識的普及;激勵主要注意的是既要和企業(yè)的發(fā)展目標(biāo)相結(jié)合，還要將員工的需求放在重中之重，因人而異的運(yùn)用具有差異性的激勵手段;授權(quán)即是給予員工一定的職權(quán)，規(guī)定授權(quán)的范圍、對象和程度并加以監(jiān)督和管理，通過讓員工充分感受自主解決困難完成工作的成就感和滿足自身職業(yè)發(fā)展的需求來實(shí)現(xiàn)提升員工的積極性和滿意度的目的。

參考文獻(xiàn)：

第5篇：內(nèi)部認(rèn)購范文

【摘要】 ［目的］探索應(yīng)用計(jì)算機(jī)處理人體正中神經(jīng)全長連續(xù)冰凍組織切片的二維圖像信息，開發(fā)3DNerve神經(jīng)三維可視化系統(tǒng)，重建人體正中神經(jīng)內(nèi)部顯微結(jié)構(gòu)并實(shí)現(xiàn)三維可視化。［方法］取新鮮人尸正中神經(jīng)標(biāo)本1例，以人長發(fā)為定位線、OCT包埋劑包埋、采用連續(xù)冰凍組織切片、乙酰膽堿脂酶組織化學(xué)法染色、高分辨率掃描儀獲取二維數(shù)碼信息后、應(yīng)用3DNerve對正中神經(jīng)顯微結(jié)構(gòu)進(jìn)行三維重建。［結(jié)果］正中神經(jīng)在不同斷面神經(jīng)束的數(shù)目、位置以及神經(jīng)束內(nèi)神經(jīng)纖維的性質(zhì)變化較大。連續(xù)斷面觀察顯示各神經(jīng)束均是混合束，未見有純粹的感覺束或運(yùn)動束的出現(xiàn)。通過3D Nerve可在任意斷面放大的視野下觀察正中神經(jīng)的顯微結(jié)構(gòu)，追蹤各神經(jīng)束在正中神經(jīng)內(nèi)的立體行徑。從而動態(tài)地展示正中神經(jīng)內(nèi)部神經(jīng)束的復(fù)雜結(jié)構(gòu)。［結(jié)論］重建的正中神經(jīng)三維可視化真實(shí)地再現(xiàn)正中神經(jīng)干全長及其內(nèi)部各神經(jīng)束和束組的三維立體結(jié)構(gòu)，可為臨床修復(fù)正中神經(jīng)損傷提供精確的斷層解剖圖像。

【關(guān)鍵詞】 正中神經(jīng)； 三維重建； 三維可視化； 乙酰膽堿脂酶

Abstract：［Objective］To explore the application of computer in dealing with twodimensional image information of human median nerve series freezing tissue sections， in order to develop nerve threedimensional visualization system (3D Nerve) ， and finally to reconstruct 3D internal microstructure of human median nerve and realize 3D visualization.［Method］One fresh cadaver median nerve was taken， located with human hair and embedded in OCT. Series freezing tissue sections were made and stained with ACHE histochemistry method， and 2D image information was obtained through high resolution scanner. Microstructure of median nerve was finally reconstructed with 3D Nerve.［Result］Different cross sections of median nerve had quite different number and positions of fasciculi. In addition， characters of fasciculus' s internal nerve fiber were also quite different.Scross sections observation showed that all fasciculi were mixed fasciculi. With the 3D Nerve， the microstructure of median nerve was able to be observed in magnifying visual field at any cross section， and the tracking of stereo course of fasciculi in median nerve became possible.［Conclusion］Reconstructed 3D visualization can reveal the whole microstructure of median nerve and the three dimensional stereostructure of fasciculi and fasciculus groups exactly and truly. It can provide exact topographic atlas and facilitate precise clixical repair of median nerve injury.

Key words：median nerve; threedimensional reconstruction; threedimensional visualization; acetylcholinesterase

盡管顯微外科技術(shù)不斷進(jìn)步，正中神經(jīng)損傷后修復(fù)的結(jié)果仍然難以預(yù)料和滿意。其中重要原因是不能分辨運(yùn)動和感覺神經(jīng)束支［1］。由于神經(jīng)纖維不是始終沿著某一神經(jīng)束行走，而是在束間互相穿插移行，呈叢狀反復(fù)交叉，使神經(jīng)束的大小、數(shù)目和位置不斷發(fā)生變化。因此迫切需要一個精確真實(shí)的正中神經(jīng)內(nèi)部顯微結(jié)構(gòu)的三維立體圖譜。

目前正中神經(jīng)顯微結(jié)構(gòu)的三維重建研究國內(nèi)外報道均極少。1945年Sunderland［2］通過大體解剖學(xué)和組織學(xué)方法描述了神經(jīng)內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜的束型變化，并繪制了神經(jīng)斷面的二維分布圖。據(jù)Sunderland的研究，甚至相距0.8 mm，神經(jīng)的局部排列已有差異。1980年Jabaley［3］描繪出正中神經(jīng)遠(yuǎn)端的一幅三維概念圖，發(fā)現(xiàn)在正中神經(jīng)的遠(yuǎn)端，束型在較長段內(nèi)保持穩(wěn)定。1984年Terzis［4］在實(shí)體解剖和組織學(xué)切片的基礎(chǔ)上建立了正中神經(jīng)的三維模型。1991年Greg P.Watchmaker［5］等對前臂遠(yuǎn)段及手部的正中神經(jīng)進(jìn)行連續(xù)組織切片邢染色后，應(yīng)用開發(fā)的軟件進(jìn)行圖像識別和統(tǒng)計(jì)處理并通過三維構(gòu)建的方法進(jìn)行了神經(jīng)束交錯變化特征的研究。但是這些以結(jié)構(gòu)研究為目的的三維構(gòu)建仍然缺乏臨床的實(shí)用性。2006年Meek MF［6］等采用磁共振DTI技術(shù)來重建在體正中神經(jīng)，但其只能顯示正中神經(jīng)主干的走形，無法更進(jìn)一步顯示正中神經(jīng)內(nèi)部結(jié)構(gòu)的顯微圖像。

本研究基于正中神經(jīng)連續(xù)冰凍組織切片的二維圖像信息，制備成正中神經(jīng)從其起始處到腕部連續(xù)的染色前、后神經(jīng)斷面的二維圖像信息數(shù)據(jù)庫，并根據(jù)該數(shù)據(jù)庫實(shí)現(xiàn)了一個具備神經(jīng)三維可視化全套功能的3D Nerve神經(jīng)三維可視化軟件系統(tǒng)，逼真地重現(xiàn)了包括正中神經(jīng)結(jié)構(gòu)信息的三維立體圖譜，為臨床上正中神經(jīng)損傷修復(fù)方式的選擇提供有益幫助，同時對組織工程化的人工神經(jīng)的仿生構(gòu)建也具有參考意義。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本準(zhǔn)備

獲取自愿捐獻(xiàn)尸體的成人新鮮左側(cè)正中神經(jīng)標(biāo)本1例(從內(nèi)、外側(cè)根組成正中神經(jīng)處至橈骨莖突，長約47 cm)。將其固定在自行設(shè)計(jì)的支架上，用4根人長發(fā)(直徑約80 μm)等距離平行地固定在標(biāo)本四周作為定位線，然后用OCT包埋劑將標(biāo)本與定位線一起包埋，液氮速凍。

1.2

連續(xù)組織切片

將正中神經(jīng)作連續(xù)冰凍組織切片(LEICA CM1850型冰凍切片機(jī))，切片厚度20 μm，切片間距為100 μm，共切取4650張切片。

1.3 染色前的切片掃描

為了防止因切片在染色后的定位點(diǎn)丟失或移位而導(dǎo)致重建的困難，染色前先以2 400 dpi的分辨率對原始圖像進(jìn)行掃描(Epson 4990型掃描儀)，以便染色前、后圖像上的定位點(diǎn)的對比配準(zhǔn)，以保證定位點(diǎn)的準(zhǔn)確性。

1.4 切片染色

將切片用乙酰膽堿脂酶(acetylcholinesterase， AChe)組織化學(xué)法進(jìn)行染色，24 h即可。

1.5

圖像獲取

將染色后的切片以2 400 dpi的分辨率進(jìn)行掃描，同時將所得JPEG格式的圖像輸入計(jì)算機(jī)。采用Photoshop CS 29.0將染色前、后的圖像進(jìn)行定位點(diǎn)的比對，以保證定位點(diǎn)的原始可靠性。然后對圖像進(jìn)行邊緣銳化、圖像增強(qiáng)，去除噪聲等二維處理，使圖像在進(jìn)行輪廓分割時更易于識別。

1.6 三維重建于可視化

將所得系列染色后的二維圖像按順序逐幅輸入計(jì)算機(jī)后，采用作者研發(fā)的用于三維神經(jīng)可視化的3D Nerve軟件系統(tǒng)進(jìn)行三維重建，獲得正中神經(jīng)干全長及內(nèi)部各神經(jīng)束的三維立體行徑圖譜。

2 結(jié) 果

2.1 正中神經(jīng)連續(xù)斷面觀察

正中神經(jīng)在不同斷面的神經(jīng)束的數(shù)目以及位置變化均較大，各神經(jīng)束均是混合束，未見有純粹的感覺束或運(yùn)動束的出現(xiàn)。

2.1.1

起始部及上臂部 正中神經(jīng)在內(nèi)、外側(cè)根組成處呈橢圓形，神經(jīng)束數(shù)量為17個，其中以運(yùn)動神經(jīng)纖維為主的混合束為6個，其余11個是以感覺神經(jīng)纖維為主的混合束(圖1)。連續(xù)斷面觀察顯示神經(jīng)束數(shù)量逐漸減少，在大圓肌下緣有神經(jīng)束8個，均為混合神經(jīng)束。在肱骨中段部位神經(jīng)束數(shù)量減少到6個，繼續(xù)向下走行神經(jīng)束數(shù)量又逐漸增加。

2.1.2

肘部 正中神經(jīng)在肘關(guān)節(jié)部呈扁帶狀，與正中神經(jīng)下行穿過旋前圓肌兩頭之間，受到肌肉的擠壓有關(guān)。由于 該處有骨間前神經(jīng)及前臂淺組屈肌等分支加入，所以神經(jīng)束數(shù)量有所增加。在肱骨內(nèi)、外髁連線處神經(jīng)束數(shù)量為14個，其中以運(yùn)動神經(jīng)纖維為主的混合神經(jīng)束為9個，其余5個是以感覺神經(jīng)纖維為主的混合神經(jīng)束(圖2)。

2.1.3 前臂部及腕部

正中神經(jīng)在前臂接近圓形，神經(jīng)束組成數(shù)量不等的神經(jīng)功能束組。連續(xù)的神經(jīng)斷面觀察顯示正中神經(jīng)在前臂神經(jīng)束與束之間的神經(jīng)纖維交錯較少，并且運(yùn)動神經(jīng)纖維有所增加。正中神經(jīng)在腕部呈扁平狀，在橈骨莖突部位神經(jīng)束的數(shù)量為21個，橈側(cè)有1個以運(yùn)動神經(jīng)纖維為主的混合束，其余20個均為混合束(圖3)，為神經(jīng)束數(shù)量最多的部位。與正中神經(jīng)在腕部發(fā)出大量終末支分布于拇收肌以外的魚際肌、第l、2蚓狀肌以及掌心、魚際、橈側(cè)3個半指的掌面及其中節(jié)和遠(yuǎn)節(jié)手指背面的皮膚相符合。

2.2 三維顯示

在正中神經(jīng)三維可視化過程中，利用3D Nerve采用不同的顏色來標(biāo)識區(qū)分不同的神經(jīng)束，束的粗細(xì)按內(nèi)部各神經(jīng)束的實(shí)際粗細(xì)進(jìn)行適當(dāng)縮小，這樣可以看清正中神經(jīng)內(nèi)部的各神經(jīng)束三維行徑(圖4)。為了更清晰地觀測正中神經(jīng)內(nèi)部各神經(jīng)束的三維立體行徑，將正中神經(jīng)全長等距離地分成九段進(jìn)行三維顯示 (圖5)。

正中神經(jīng)可視化結(jié)果能夠真實(shí)地再現(xiàn)正中神經(jīng)干全長及其內(nèi)部各神經(jīng)束和束組的三維立體結(jié)構(gòu)；形象地展示各神經(jīng)束的交叉穿插、混合重組的變化規(guī)律；既能單獨(dú)顯示正中神經(jīng)干或單個神經(jīng)束的立體行徑，又能將二者疊加混合顯示，還能隱藏其它的結(jié)構(gòu)，追蹤單個神經(jīng)束或整個正中神經(jīng)干，從而動態(tài)地展示正中神經(jīng)內(nèi)部神經(jīng)束的復(fù)雜結(jié)構(gòu)(圖6)。通過3D Nerve，重建的正中神經(jīng)能在空間位置上繞任意軸旋轉(zhuǎn)任意角度，或者以不同的速度連續(xù)旋轉(zhuǎn)，便于從不同的角度對各神經(jīng)束的形態(tài)、空間位置及相互毗鄰關(guān)系進(jìn)行觀察；還可在任意斷面進(jìn)行任意角度的切割，并可在放大的視野下觀察正中神經(jīng)的顯微結(jié)構(gòu)(圖1～7)。圖1 正中神經(jīng)內(nèi)、外側(cè)根匯合部神經(jīng)斷面示意圖 共有神經(jīng)束17個，其中6個神經(jīng)束是以運(yùn)動神經(jīng)纖維為主的混合束，其余11個神經(jīng)束是以感覺神經(jīng)纖維為主的混合束 圖2 正中神經(jīng)在肘部肱骨內(nèi)、外髁連線處神經(jīng)斷面示意圖 共有神經(jīng)束14個，其中9個神經(jīng)束是以運(yùn)動神經(jīng)纖維為主的混合束，其余5個神經(jīng)束是以感覺神經(jīng)纖維為主的混合束 圖3 正中神經(jīng)在橈骨莖突部神經(jīng)斷面示意圖 共有神經(jīng)束21個，橈側(cè)有1個以運(yùn)動神經(jīng)纖維為主的混合束，余20個均為混合束。圖1～3中A為該神經(jīng)斷面的掃描圖片進(jìn)行輪廓分割的示意圖(分辨率為2400 dpi)，B為在3D Nerve中該神經(jīng)斷面的輪廓匹配示意圖。淡藍(lán)色代表以感覺神經(jīng)纖維為主的混合束;綠色代表以運(yùn)動神經(jīng)纖維為主的混合束；紫藍(lán)色代表混合神經(jīng)束 圖4 正中神經(jīng)起始部位，長5 cm。A為神經(jīng)束中心線示意圖，每一中心線代表一神經(jīng)束的走行行徑；B為神經(jīng)束表面重建示意圖。正中神經(jīng)內(nèi)部神經(jīng)束結(jié)構(gòu)相當(dāng)復(fù)雜，它們相互間不斷交叉重組，形成獨(dú)特的神經(jīng)束網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。采用不同的顏色來標(biāo)識區(qū)分不同的神經(jīng)束，束的粗細(xì)按內(nèi)部各神經(jīng)束的實(shí)際粗細(xì)進(jìn)行適當(dāng)縮小，這樣可以看清正中神經(jīng)內(nèi)部的各神經(jīng)束三維行徑。C為包括神經(jīng)外膜的表面重建示意圖。箭頭所指方向?yàn)榻酥吝h(yuǎn)端的走行方向 圖5 A～I(xiàn)分別等距離顯示正中神經(jīng)內(nèi)部神經(jīng)束的三維立體行徑(自正中神經(jīng)內(nèi)外側(cè)根匯合處至橈骨莖突)箭頭所指方向?yàn)榻酥吝h(yuǎn)端的走行方向。采用不同的顏色來標(biāo)識區(qū)分不同的神經(jīng)束 圖6 A～C示在3D Nerve中進(jìn)行從近端至遠(yuǎn)端的正中神經(jīng)追蹤的連續(xù)截圖 箭頭所指方向?yàn)榻酥吝h(yuǎn)端的走行方向 圖7 A、B圖示從不同角度觀察圖6中E段正中神經(jīng)的示意圖 便于從不同的角度對各神經(jīng)束的形態(tài)、空間位置及相互毗鄰關(guān)系進(jìn)行觀察。C圖示對E段正中神經(jīng)行任意斷面切割的示意圖，可以觀測該斷面正中神經(jīng)內(nèi)各神經(jīng)束的數(shù)量及分布位置。箭頭所指方向?yàn)榻酥吝h(yuǎn)端的走行方向

3 討 論

3.1 正中神經(jīng)三維重建與可視化的意義

周圍神經(jīng)缺損的修復(fù)與重建是當(dāng)前周圍神經(jīng)外科領(lǐng)域的一大難題。目前臨床上應(yīng)用骨骼縮短、神經(jīng)改道、自體神經(jīng)移植或移位等方法來進(jìn)行神經(jīng)缺損的修復(fù)。神經(jīng)移植雖然效果尚可，但是神經(jīng)來源有限，且遺留有供區(qū)感覺減退，移植神經(jīng)直徑往往與受體神經(jīng)不符等問題［7］。而組織工程化人工神經(jīng)則有著明顯的優(yōu)點(diǎn)：(1)不受來源限制，可被制成任意長度和口徑;(2)采用套接法將神經(jīng)遠(yuǎn)近端放置于神經(jīng)管內(nèi)，手術(shù)簡單，能有效避免吻合端神經(jīng)瘤產(chǎn)生，并防止新生神經(jīng)纖維向外生長，保護(hù)再生神經(jīng)纖維有效地向遠(yuǎn)端延伸［8］。因此，近年來人們開始用組織工程方法體外構(gòu)建人工神經(jīng)，即將體外培養(yǎng)擴(kuò)增的大量的雪旺細(xì)胞和生物材料復(fù)合來引導(dǎo)周圍神經(jīng)再生［9，10］。但是人工神經(jīng)研制的重要前提條件是首先要明確神經(jīng)的內(nèi)部神經(jīng)束的復(fù)雜交叉重組關(guān)系。只有按照人體神經(jīng)內(nèi)部天然精確結(jié)構(gòu)來構(gòu)建人工神經(jīng)，才能獲得最佳的效果。本研究利用計(jì)算機(jī)真實(shí)地實(shí)現(xiàn)了正中神經(jīng)的三維可視化，能準(zhǔn)確地顯示正中神經(jīng)內(nèi)部每一神經(jīng)束的各個斷面及其全長的解剖結(jié)構(gòu)及其相互關(guān)系，各神經(jīng)束中任意斷面的感覺與運(yùn)動神經(jīng)纖維的準(zhǔn)確定位資料，因此對于組織工程化人工神經(jīng)的仿生構(gòu)建有著重要的指導(dǎo)意義。同時為臨床上正中神經(jīng)損傷的修復(fù)方式的選擇提供一定的解剖參考意義。并且提供了一種周圍神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)部顯微結(jié)構(gòu)三維可視化的有效方法，為中國虛擬人周圍神經(jīng)系統(tǒng)的構(gòu)建作了有益的探索。

3.2

定位方法

三維重建要準(zhǔn)確顯示重建結(jié)構(gòu)的空間形態(tài)，必須使連續(xù)切片的圖像有和原物體一樣的對應(yīng)空間立體關(guān)系，即對圖像進(jìn)行定位。 若定位不準(zhǔn)確，重建的圖像就會失真。組織的連續(xù)冰凍切片在切片、染片的過程中不可避免地會產(chǎn)生一定的偏差，其位置的客觀性和準(zhǔn)確性均受到一定的限制，所以需要通過設(shè)置參照的方法來保證切片的對位始終準(zhǔn)確［11］。定位方法一般可分為外定位和內(nèi)定位2種，這2種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)。所謂外定位方法，是指采用各種機(jī)械的方法在連續(xù)切片圖像上標(biāo)記一些基準(zhǔn)點(diǎn)，通過基準(zhǔn)點(diǎn)的對齊來達(dá)到定位效果。陳增淦［12］等采用人長發(fā)作為外定位的材料，取得較好效果。而所謂內(nèi)定位方法，是指根據(jù)生物組織的連續(xù)性和完整性，通過一定的配準(zhǔn)算法達(dá)到兩幅連續(xù)切片圖像間的對齊。它具有靈活、準(zhǔn)確度高和可進(jìn)行回溯性研究等優(yōu)點(diǎn)，所以是較有發(fā)展前途的一類定位方法。但是內(nèi)定位并不足以解決一些非線性變形如切片的卷曲等情況，而且由于存在需要針對重建對象專門設(shè)計(jì)軟件、人機(jī)交互工作量及計(jì)算量均較大等問題，還有待改進(jìn)，目前還無法完全替代外定位的方法。因此采用內(nèi)定位和外定位相結(jié)合的方法，定位精度將更為理想，這是今后的發(fā)展方向［13］。

本研究將標(biāo)本固定在自行設(shè)計(jì)的支架上，采用4根人長發(fā)作為定位線，分別等距離固定在神經(jīng)四周，頭發(fā)切割后在切片上留下的點(diǎn)作為標(biāo)志點(diǎn)。頭發(fā)直徑小，而且與玻片的粘附性較好，同時在玻片上用PolyLLysine涂層，增加了組織的粘附能力，這樣就保證了定位的準(zhǔn)確性。作者認(rèn)為這是計(jì)算機(jī)三維重建研究中一種準(zhǔn)確而且實(shí)用的定位方法。

3.3 圖像的變形

圖像的變形也是圖像信息處理時經(jīng)常會遇到的一個難題。正中神經(jīng)的標(biāo)本長約47 cm，而冰凍切片機(jī)最多允許的標(biāo)本長度為2～3 cm，所以必須將標(biāo)本分割成多個長3 cm左右的組織塊分別進(jìn)行冰凍切片，將組織塊固定在冰凍切片機(jī)上時可能產(chǎn)生位置偏移，導(dǎo)致切片角度的細(xì)微差別。連續(xù)組織切片可能會產(chǎn)生皺褶、破損或不規(guī)則畸變。此外，在染色和掃描過程中也有可能會產(chǎn)生圖像的變形、旋轉(zhuǎn)和偏移。這些變形均可以通過四個定位點(diǎn)的位置用軟件進(jìn)行還原，因?yàn)榍衅穸葍H為20 μm，可以認(rèn)為這20 μm間距內(nèi)的圖像信息幾乎是不變的，然后可以上一幅圖像為模板，對相應(yīng)位置圖像信息進(jìn)行校正，這樣可以獲得準(zhǔn)確的原始圖像信息。

3.4 三維重建的方法

三維重建的方法主要分為2類，一類是基于中間幾何圖元的表面繪制法，另一類是直接基于三維數(shù)據(jù)場的體素繪制法［14］。

在本研究中，作者采用單輪廓線和多輪廓線之間的表面繪制法來進(jìn)行重建，定義了三維神經(jīng)表面的幾何信息，獲得了較好的外觀效果。同時，由于作者在正中神經(jīng)的輪廓分割及匹配時采用了部分手工干預(yù)，從而有效地提高了準(zhǔn)確性。

本研究首次應(yīng)用3D Nerve較為成功地重建了正中神經(jīng)的三維結(jié)構(gòu)及其內(nèi)部神經(jīng)束的立體行徑，為臨床上正中神經(jīng)損傷修復(fù)方式的選擇和組織工程化人工神經(jīng)的仿生構(gòu)建提供了有益幫助。同時還確定了一種應(yīng)用周圍神經(jīng)連續(xù)冰凍組織切片通過計(jì)算機(jī)輔助三維重建的實(shí)用方法，為數(shù)字化虛擬人神經(jīng)系統(tǒng)的構(gòu)建做出了有益的探索，所得的結(jié)果可以組合到中國數(shù)字化虛擬人數(shù)據(jù)庫中，豐富我國數(shù)字化虛擬人的研究，有較為廣泛的應(yīng)用前景。

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第6篇：內(nèi)部認(rèn)購范文

    談到報業(yè)的人力資源管理,之前的研究者往往更多是聚焦于人力資源管理的某個具體模塊,而忽略了企業(yè)的溝通機(jī)制,尤其是內(nèi)部溝通機(jī)制對于人力資源管理的重要性。正是基于這樣的背景,本文對報業(yè)內(nèi)部溝通機(jī)制對人力資源管理的意義及內(nèi)部溝通機(jī)制的提升對策進(jìn)行探討和研究。

    一、企業(yè)內(nèi)部溝通對人力資源管理的重要性

    管理是一門溝通的藝術(shù),從一定意義上講,溝通就是管理的本質(zhì)。溝通是為了一個設(shè)定的目標(biāo),把信息、思想和情感在個人或群體間傳遞,并且達(dá)成共同協(xié)議的過程。企業(yè)的溝通分為外部溝通和內(nèi)部溝通。內(nèi)部溝通是企業(yè)提高效率和信息資源共享的重要途徑之一。企業(yè)要獲得持續(xù)的發(fā)展,就必須以強(qiáng)有力的企業(yè)內(nèi)部溝通網(wǎng)絡(luò)及時、準(zhǔn)確、精要地將企業(yè)的目標(biāo)及由此產(chǎn)生的具體措施與員工分享,以獲得他們的理解、認(rèn)可與支持。而作為企業(yè)管理核心之一的人力資源管理,更是直接以一刻也離不開溝通的人為管理對象,可以說溝通尤其是企業(yè)內(nèi)部溝通狀況,直接決定了企業(yè)人力資源管理的成敗,也對企業(yè)的戰(zhàn)略目標(biāo)的實(shí)現(xiàn)與否有著重大而深遠(yuǎn)的影響。

    溝通的功能從管理的角度看主要有交流、協(xié)調(diào)、激勵、控制等作用,主要表現(xiàn)在:

    1.交流功能

    一個良好的溝通機(jī)制將能有效地整合情感要素,充分尊重員工的感情需求,使員工能夠達(dá)成精神層面的充分交流,以調(diào)整好自己的位置、行為的位置和心態(tài)的位置,從而在員工內(nèi)心深處激發(fā)起對企業(yè)的向心力、凝聚力和歸屬感,創(chuàng)造一種良好、和諧、積極向上的氛圍,從而推動企業(yè)文化的形成。而這也為企業(yè)人力資源管理工作的開展?fàn)I造了良好的氛圍,創(chuàng)造了有利的環(huán)境。

    2.協(xié)調(diào)功能

    良好的內(nèi)部溝通有助于正確處理組織內(nèi)外各種關(guān)系,為組織正常運(yùn)轉(zhuǎn)創(chuàng)造良好的條件和環(huán)境,從而促進(jìn)組織目標(biāo)的實(shí)現(xiàn)。首先,通過有效的溝通,人力資源參與組織戰(zhàn)略的形成。其次,有效溝通有利于提高人力資源管理決策的科學(xué)性與有效性。再次良好溝通有利于人力資源管理的實(shí)施。

    3.激勵功能

    溝通激勵是現(xiàn)代企業(yè)人力資源管理中最重要的非薪酬激勵。良好的內(nèi)部溝通,一定程度上說明企業(yè)有著較高的員工參與度,有利于增強(qiáng)員工的責(zé)任感和主人翁意識,激發(fā)員工的工作熱情,提高員工滿意度,減少人才流失。此外溝通還是績效管理有效實(shí)施的重要管理工具,它貫穿于整個績效管理的四個環(huán)節(jié)——績效計(jì)劃、績效輔導(dǎo)、績效考核、績效結(jié)果的運(yùn)用。可以說績效管理就是上下級間就績效目標(biāo)的設(shè)定及實(shí)現(xiàn)而進(jìn)行的持續(xù)不斷雙向溝通的一個過程。

    4.控制功能

    內(nèi)部溝通是組織內(nèi)部各層級之間信息流通的重要手段。通過申訴、舉報等方式,企業(yè)及時發(fā)現(xiàn)管理中存在的問題,并且形成一種無形的機(jī)制,對管理者進(jìn)行有效的監(jiān)督,實(shí)現(xiàn)內(nèi)部控制功能。員工有了發(fā)表自己意見的正式途徑,也有利于員工的心理健康。

    二、企業(yè)內(nèi)部溝通的種類和形式

    企業(yè)內(nèi)部溝通根據(jù)傳播的方向可分為下行溝通、上行溝通、平行溝通;根據(jù)傳播媒介可分為語言溝通和非語言溝通;從溝通的有效性上分,溝通可以分為有效溝通和無效溝通;從管理角度分,溝通可分為戰(zhàn)略型溝通和戰(zhàn)術(shù)型溝通;從溝通的廣泛性上分,溝通可以分為個人溝通和群體溝通等。

    目前企業(yè)內(nèi)部溝通常見的形式有:

    1.面對面交流 。面對面交流是最常見的溝通交流方式,上下級之間布置、報告工作,同事之間溝通協(xié)調(diào)問題,經(jīng)常都采用這種方式。

    2.電話。上下級之間、同事之間借助電話這一傳播工具進(jìn)行的有聲交流方式

    3.會議。定期不定期的舉行會議是內(nèi)部溝通的重要方式。

    4.文件。公司下發(fā)有關(guān)文件是典型的下行溝通。對于與員工利益密切相關(guān)的或者需要員工共同遵守的文件,必須與員工進(jìn)行徹底溝通,確保執(zhí)行到位。

    5.業(yè)務(wù)報告。報告無論是口頭上的還是書面上形成文字的,都屬上行溝通,一般需要批復(fù)或口頭上給予反饋,從而形成上下信息交流上的互動。

    6.內(nèi)部報刊。很多企業(yè)都通過辦內(nèi)部報刊來增進(jìn)企業(yè)與員工之間的溝通。

    7.舉辦各種活動。通過舉辦各種活動如演講比賽、各種勞動競賽、講座、專題培訓(xùn)等,可以有效地促進(jìn)企業(yè)與員工及同事之間的溝通。

    8.內(nèi)部辦公系統(tǒng)、電子論壇、即時通訊系統(tǒng)。這些電子交流平臺在方便辦公的同時,也使內(nèi)部溝通和員工交流更加便捷和順暢,節(jié)約了溝通成本。

    除了上述形式的溝通之外,對于非語言溝通也應(yīng)引起我們重視,比如面對面交流時的雙方的穿著、舉止及其相關(guān)禮儀也非常重要,會直接影響企業(yè)管理過程的效果。此外,員工對辦公環(huán)境、工作氣氛的感受,其實(shí)也是一種溝通。

    三、報業(yè)內(nèi)部溝通機(jī)制提升的對策及思路

    我國報業(yè)作為一門行業(yè)和產(chǎn)業(yè),具有其特殊性。它脫胎于事業(yè)單位體制,直到二十世紀(jì)八十年代,才開始內(nèi)部經(jīng)營體制的改革,如自辦發(fā)行、實(shí)行事業(yè)單位企業(yè)化管理等。1996年1月,廣州日報報業(yè)集團(tuán)掛牌成立,成為國內(nèi)第一家報業(yè)集團(tuán),標(biāo)志著中國報業(yè)進(jìn)入集團(tuán)化經(jīng)營時代。隨著報業(yè)集團(tuán)化經(jīng)營的發(fā)展,通過自主發(fā)展和兼并重組等方式,報業(yè)集團(tuán)的規(guī)模越來越大,內(nèi)設(shè)機(jī)構(gòu)和下屬單位增多,容易造成內(nèi)部條塊分割嚴(yán)重,內(nèi)部溝通不暢,交易成本上升。為有效提升內(nèi)部溝通,必須注重以下幾個方面:

    1.確定溝通標(biāo)準(zhǔn)

    任何的溝通只有在有了標(biāo)準(zhǔn)的情況下才有意義,而衡量任何溝通活動的意義,都會最終追溯到企業(yè)的戰(zhàn)略和目標(biāo)。隨著信息技術(shù)的不斷進(jìn)步和新媒介形態(tài)的不斷出現(xiàn)和發(fā)展,網(wǎng)絡(luò)媒體和移動媒體發(fā)展迅猛,傳統(tǒng)報業(yè)面臨越來越大的挑戰(zhàn)。很多單位薪酬待遇相對下降,導(dǎo)致員工的士氣受到打擊,容易產(chǎn)生一些消極和低落情緒,優(yōu)秀人才流失現(xiàn)象加劇。在此情況下,通過令員工聚焦于集團(tuán)的目標(biāo),集團(tuán)可以在目標(biāo)一致的基礎(chǔ)上建立起以目標(biāo)為導(dǎo)向的企業(yè)文化。從這個方面來說,企業(yè)必須首先要構(gòu)建好自身的業(yè)績管理體系,通過設(shè)置明確、科學(xué)的業(yè)績目標(biāo),用以指導(dǎo)企業(yè)行為,包括溝通行為。

    2.建立合理的組織機(jī)構(gòu)

    如果組織機(jī)構(gòu)過于龐大,中間層次太多,那么,信息從最高決策傳遞到下屬單位不僅容易產(chǎn)生信息的失真,而且還會浪費(fèi)大量時間,影響信息的及時性和溝通效率。有的學(xué)者統(tǒng)計(jì),如果一個信息在高層管理者那里的正確性是100%,到了信息的接受者手里可能只剩下20%的正確性。為此需要加大力度,對報業(yè)內(nèi)部行政、采編及經(jīng)營單位的結(jié)構(gòu)調(diào)整和資源整合力度,盡可能減少管理層級,實(shí)現(xiàn)扁平化管理,從而提高運(yùn)行效率,降低溝通成本,減少溝通壁壘和障礙。

    3.強(qiáng)化內(nèi)部培訓(xùn)

    強(qiáng)化培訓(xùn)是為了在企業(yè)的內(nèi)部構(gòu)建一種統(tǒng)一的溝通風(fēng)格和行為模式,減少因溝通形式不一而造成的摩擦。通過培訓(xùn)可以將一些概念性的東西固定下來,形成大家一說出口就能被理解的企業(yè)話語。參照GE等跨國企業(yè)的做法,目前國內(nèi)的華為、騰訊等公司,都組建了企業(yè)大學(xué)或?qū)W院,負(fù)責(zé)對員工進(jìn)行各種培訓(xùn)。通過這些培訓(xùn),一方面讓企業(yè)管理人員學(xué)習(xí)必要的管理技能、業(yè)務(wù)技能、溝通技能等;另一方面也統(tǒng)一了大家的意識和管理理念,為企業(yè)內(nèi)部的有效溝通與執(zhí)行奠定良好基礎(chǔ)。

    4.健全內(nèi)部溝通渠道,完善反饋機(jī)制

    尤其要重視網(wǎng)絡(luò)等新的傳播手段和溝通渠道的作用。此外一些以前不受重視的非正式溝通,如今發(fā)揮的積極作用越來越明顯,比如現(xiàn)在所流行的柔性溝通是以人為出發(fā)點(diǎn)和中心,圍繞著激發(fā)和調(diào)動人的主動性、積極性、創(chuàng)造性展開的,以實(shí)現(xiàn)個人和企業(yè)共同發(fā)展的一系列管理溝通活動,更在很大程度上適應(yīng)了企業(yè)發(fā)展的需要。 此外,企業(yè)還應(yīng)注重溝通反饋機(jī)制的建立,使自上而下的溝通和自下而上的溝通達(dá)到平衡。具體到人力資源管理方面,從新員工進(jìn)入公司到被任用、從員工成長到期間的異動、乃至離職,溝通可以隨著員工的系列變遷過程細(xì)分為“入職前溝通、崗前培訓(xùn)溝通、試用期間溝通、轉(zhuǎn)正溝通、調(diào)崗溝通、定期考核溝通、離職面談、離職后溝通管理”等八個方面,從而構(gòu)成一個完整的員工成長溝通管理體系,以改善和提升人力資源管理水平、為公司領(lǐng)導(dǎo)經(jīng)營管理決策提供重要參考信息。

    5.積極應(yīng)對員工隊(duì)伍多元化帶來的影響

    在報業(yè)轉(zhuǎn)型過程中,人才的需求結(jié)構(gòu)與原有業(yè)務(wù)格局和人才結(jié)構(gòu)反差較大,原本不受重視的經(jīng)營管理、技術(shù)開發(fā)、財務(wù)管理、審計(jì)、法律等人才需求空前旺盛,但這些人才恰恰是集團(tuán)短缺的人才。為了在市場中贏得競爭優(yōu)勢,必須充分利用多元化的員工隊(duì)伍所產(chǎn)生的能量,包括年齡、性格、國籍、宗教信仰、文化背景等,員工隊(duì)伍的非同質(zhì)性程序越來越高,需求也更加多元化。而人力資源管理者應(yīng)更加注重培養(yǎng)與這些多元化背景的員工進(jìn)行有效溝通的能力,最大限度地發(fā)揮這些多元化員工隊(duì)伍的能量,進(jìn)而提升集團(tuán)在外部的形象和聲譽(yù),在留住人才的同時,也吸引外部更多的人才。

    參考文獻(xiàn):

第7篇：內(nèi)部認(rèn)購范文

關(guān)鍵詞 預(yù)約合同 繼續(xù)履行 實(shí)務(wù)案例

一、預(yù)約合同的含義

所謂預(yù)約，或稱為預(yù)備性契約，是指當(dāng)事人約定為在將來一定期限內(nèi)訂立合同而達(dá)成的允諾或協(xié)議。根據(jù)《布萊克法律詞典》的定義，“預(yù)約，是指由一個人做成的契約或約定，它具有排除這個人合法的進(jìn)入另一項(xiàng)性質(zhì)相同的合同的屬性。將來應(yīng)訂立的合同成為本合同，而約定訂立本合同的合同則為預(yù)約合同。2012年6月5日，最高人民法院公布的《關(guān)于審理買賣合同糾紛案件適用法律問題的解釋》（法釋[2012]8號，簡稱《買賣合同司法解釋》第2條規(guī)定：“當(dāng)事人簽訂認(rèn)購書、訂購書、預(yù)訂書、意向書、備忘錄等預(yù)約合同，約定在將來一定期限內(nèi)訂立買賣合同，一方不履行訂立買賣合同的義務(wù)，對方請求其承擔(dān)預(yù)約合同的違約責(zé)任或者要求解除預(yù)約合同并主張損害賠償?shù)模嗣穹ㄔ簯?yīng)予支持。從該條規(guī)定可以看出，所謂預(yù)約就是約定在將來一定期限內(nèi)訂立合同。從這上面解釋可以看出預(yù)約合同本身就是一種契約，它的標(biāo)的即訂立契約的行為目的是確保將來與相對人訂立特定的合同。預(yù)約合同是具有獨(dú)立性、期限性、內(nèi)容應(yīng)當(dāng)明確具體、諾誠性等特征。

二、實(shí)務(wù)案例評析

預(yù)約合同當(dāng)事人若未按合同約定誠信地履行應(yīng)盡義務(wù)，依法應(yīng)承擔(dān)違約責(zé)任。《合同法》規(guī)定了違約責(zé)任的形式主要包括繼續(xù)履行、采取補(bǔ)救措施、賠償損失、減少價金等等。實(shí)踐中，有關(guān)預(yù)約違約責(zé)任爭議頗大，尤其集中在繼續(xù)履行這一問題上，下文著重分析法院對此問題的不同態(tài)度。

（一）肯定的態(tài)度

法院對預(yù)約合同是否適用繼續(xù)履行的問題持肯定態(tài)度并不多見，筆者在所能搜集到的法院判決書中，見到的唯一的一個判決強(qiáng)制當(dāng)事人締結(jié)本約的是”陳小紅訴浙江福田房地產(chǎn)開發(fā)有限公司房屋認(rèn)購合同糾紛案。

案例1：2000年11月11日，陳小紅與福田公司簽訂了《福田花園預(yù)定單》，雙方就房屋的面積、單價及交房日期均已達(dá)成合意，并約定陳小紅應(yīng)在接到福田公司通知后10日內(nèi)與其簽訂商品房預(yù)售合同。而福田公司隨后向陳小紅發(fā)出一份通知，稱由于成本增加，僅愿以時價的九成出賣房屋，若陳小紅不愿購買，福田公司欲雙倍返還訂金。陳小紅對此表示反對并要求福田公司按原協(xié)議繼續(xù)履行。雙方協(xié)商未果，陳小紅遂訴至法院，請求判令違約方繼續(xù)履行預(yù)約合同。

原審法院以雙方未能達(dá)成合意，即該預(yù)訂單之簽訂商品房預(yù)售合同的目的無法實(shí)現(xiàn)為由，駁回了陳小紅的訴訟請求。陳小紅不服一審判決，遂向浙江省高級人民法院提起上訴。

經(jīng)省高院審理后認(rèn)為，雙方當(dāng)事人簽訂的預(yù)訂單已具備了商品房買賣合同的主要條款，且依據(jù)預(yù)訂單之約定，所謂簽訂商品房預(yù)售合同，僅需雙方辦理有關(guān)的合約手續(xù)，預(yù)售合同的主要條款以預(yù)訂單為準(zhǔn)，而其他條款則依商品房預(yù)售合同的格式文本和交易習(xí)慣而定。因此，并不存在法律上或事實(shí)上不能履行的情形，故判令福田公司繼續(xù)履行《福田花園預(yù)訂單》。

案例3：2003年5月5日，瀏陽市某有限公司（原告）與王B（被告）簽訂《瀏陽市農(nóng)副產(chǎn)品大市場蔬菜肉禽水產(chǎn)批發(fā)城（二期工程）內(nèi)部認(rèn)購單》，雙方約定了被告認(rèn)購門面的面積、房款及付款方式，同時還約定了簽訂《內(nèi)部認(rèn)購單》后，在蔬菜肉禽水產(chǎn)批發(fā)城正式公開發(fā)售十日內(nèi)簽署《商品房買賣合同》。其后，被告雖多次催促原告交付門面，但最終都因原告未取得“商品房預(yù)售許可證明“而未能履行。原告遂與被告協(xié)商退還其交付的定金，但被告堅(jiān)持要求交付門面。雙方協(xié)商未果，原告訴至法院，請求法院判令解除合同。

法院認(rèn)為，本案中《認(rèn)購單》性質(zhì)為預(yù)約合同。”商品房預(yù)售許可證明“雖為法定的商品房預(yù)售的前置條件，但不影響預(yù)約合同的效力。因該《認(rèn)購單》系雙方的真實(shí)意思表示，且不違反法律、行政法規(guī)的規(guī)定，故應(yīng)認(rèn)定為有效，被告可以請求原告履行訂立《商品房買賣合同》的義務(wù)。但原告尚未取得許可證明，則無法簽訂《商品房買賣合同》，故判決解除《內(nèi)部認(rèn)購單》。

（二）否定的態(tài)度

較之肯定的態(tài)度，大多法院卻不贊成預(yù)約合同適用繼續(xù)履行。

案例3：蔣新瓊（原告）與郴州市蘇仙區(qū)城鎮(zhèn)建議綜合開發(fā)公司（被告）于2007年4月13日簽訂“房屋內(nèi)部認(rèn)購書”，約定了認(rèn)購房屋的面積、價款等內(nèi)容。2011年11月18日，雙方就所購房屋再次簽訂“內(nèi)部團(tuán)購協(xié)議”，約定雙方于2012年3月30日前簽訂《商品房買賣合同》。后由于開發(fā)項(xiàng)目名稱改變，被告表示愿與原告重新簽訂“認(rèn)購協(xié)議書”《但房屋面積及價款均要增加，原告則表示重新簽訂協(xié)議，但只愿意增加面積，不愿意增加價款。雙方協(xié)商未果，原告訴至法院，請求法院“判令被告履行合同義務(wù)，以原協(xié)議中的價格與原告簽訂商品房預(yù)售合同。”

第8篇：內(nèi)部認(rèn)購范文

本案工程貴司暫定銷售周期最長不超過16個月，因而根據(jù)現(xiàn)在市場實(shí)際情況，未來市場發(fā)展方向，我們把項(xiàng)目的整個營銷周期化分為以下幾個階段。籌備期：通過營銷推廣策劃，明確營銷推廣的總體思路和策略，對營銷推廣實(shí)施組強(qiáng)，作出初步安排和計(jì)劃，通過售樓中心和工地現(xiàn)場的建設(shè)包裝，樹立樓盤初步信息，反饋市場信息。

引銷期：(分為內(nèi)部認(rèn)購期和開盤期)通過對樓盤綜合形象的樹立和推廣，提高樓盤市場知名度，向公眾灌輸項(xiàng)目的主題思想，了解市場反應(yīng)，市場實(shí)際需求，檢討價格策略和推廣策略。針對市場的不同需求，以針對性的“賣點(diǎn)”進(jìn)行推廣。引導(dǎo)消費(fèi)者對樓盤的關(guān)注和認(rèn)同。核對目標(biāo)客戶群的劃分，針對“賣點(diǎn)”制定更有針對性的推廣策略。

強(qiáng)銷期：針對已對樓盤形成初步認(rèn)同的消費(fèi)者。通過樣板房參觀活動，業(yè)主聯(lián)誼活動，通過對工程進(jìn)度、工程質(zhì)量、物業(yè)管理、會所設(shè)施、企業(yè)文化等綜合宣傳，進(jìn)一步強(qiáng)化消費(fèi)者的認(rèn)同感，促使消費(fèi)者購買行為的完成。

續(xù)銷期：針對消費(fèi)者對樓盤認(rèn)為存在的問題，通過各種促銷活動，作針對性的宣傳銷售。

清盤期：在樓盤銷售尾期，對樓盤的環(huán)境實(shí)景加以報導(dǎo)宣傳，對開發(fā)商實(shí)力加以肯定。聘請知名物業(yè)顧問公司加盟物業(yè)管理，擴(kuò)大物業(yè)管理公司宣傳力度，最終完成項(xiàng)目清盤。

二、銷售階段劃分

20__.4.1-20__.5.30籌備期

20__.6.1-20__.7.1內(nèi)部認(rèn)購期

20__.7.2-20__.10.30開盤期

20__.11.1-20__.3.30強(qiáng)銷期

20__.4.1-20__.6.30續(xù)銷期

20__.7.1-20__.9.30清盤期

20__.4.1-20__.5.30籌備期

任務(wù)：入市策略擬定，相關(guān)資料準(zhǔn)備，辦理入市手續(xù)

工作重點(diǎn)：

1、建筑設(shè)計(jì)定案

2、園林景觀定案

3、會所項(xiàng)目定案

4、藝術(shù)大堂定案

5、行銷策略定案

6、研究市場實(shí)時情況

7、召開動腦會議

8、擬定公開（PR）或促銷（）計(jì)劃

9、確定產(chǎn)品推廣的造勢活動

10、售樓資料（戶型圖、售樓書、認(rèn)購須知、價格表、項(xiàng)目說明、貸款利率表等）準(zhǔn)備齊備

11、公關(guān)活動籌備定案及實(shí)施

12、接待中心及樣板房設(shè)計(jì)制作

13、炒作項(xiàng)目特色

14、廣播搞制作

15、電視廣告制作

16、報紙廣告制作

17、銷售人員招聘與培訓(xùn)

18、現(xiàn)場POP設(shè)計(jì)

19、確定銷售組織架構(gòu)

20、工地圍墻設(shè)計(jì)制作

21、路牌廣告制作，引起注意，吸引客戶

22、車身廣告制作

23、模型廠家定案制作

20__.6.1-20__.7.1內(nèi)部認(rèn)購期

任務(wù)：

1、散布擴(kuò)大知名度

2、告知業(yè)界與媒體造成耳語傳播

3、攔截其他競爭物業(yè)客源

4、極力塑造產(chǎn)品形象，引發(fā)消費(fèi)者一窺究竟的欲望

工作重點(diǎn)：

1、對來客散播耳語，使客戶介紹客戶，以醞釀待購客戶群體

2、公開前的引導(dǎo)，以使目標(biāo)/:請記住我站域名/客戶停止購買周邊同質(zhì)樓盤

3、預(yù)收訂金，而于公開發(fā)售當(dāng)日于現(xiàn)場補(bǔ)足首期款，簽定購房合同，形成公開當(dāng)日購買熱潮

4、報紙廣告定案刊出

5、電視、電臺廣告定案播出

6、先期海報散發(fā)

7、商品房預(yù)售許可證辦理完成

8、售樓現(xiàn)場制作完成

9、銷售人員進(jìn)場

10、公關(guān)活動具體實(shí)施

20__.7.2-20__.10.30開盤期

任務(wù)：

1、一舉豐收前期醞釀成果，造成現(xiàn)場購買人氣旺盛的局面

2、將銷售成績迅速公布于眾，震撼目標(biāo)客戶，誘發(fā)其購買欲望

3、配合公關(guān)活動聚積人氣

工作重點(diǎn)：

1、收集客戶資料及聯(lián)絡(luò)以往記載客戶，營造現(xiàn)場氣氛，并檢討客戶反應(yīng)以修正銷售及廣告路線

2、模型進(jìn)場，備齊各種銷售資料

3、反復(fù)講習(xí)銷售教材及答客問

4、所有廣告媒體量達(dá)到高峰，隆重公開本項(xiàng)目

5、通知已繳訂金的客戶到售樓現(xiàn)場補(bǔ)足首期款，簽購房合同

6、價格表上市

7、樣板房制作完成（根據(jù)售樓部面積大小決定是否制作）

20__.11.1-20__.3.30強(qiáng)銷期

任務(wù)：

1、加強(qiáng)客戶介紹

2、舉辦各種業(yè)主活動，利用客戶耳語推廣

工作重點(diǎn)：

1、客戶追蹤

2、戶外媒體再加強(qiáng)

3、電臺、電視廣告頻數(shù)加大

4、加強(qiáng)現(xiàn)場銷控及炒作

5、針對所有客戶，大量使用各種媒體

6、針對銷售情形，分析市場，修正廣告

7、利用已訂客戶介紹客戶，并積極追蹤，促成成交

8、報紙廣告更具針對性，賣點(diǎn)更為突出

9、舉行封頂儀式，增加客戶信心及公司聲譽(yù)

20__.4.146-20__.6.30續(xù)銷期

任務(wù)：

1、針對目標(biāo)客戶集中區(qū)域加強(qiáng)海報派夾

2、電話追蹤有望客戶

3、加強(qiáng)補(bǔ)足，簽約工作

工作重點(diǎn)：

1、延續(xù)銷售氣勢

2、過濾客戶資料，追蹤客戶，掌握回籠客戶

3、持續(xù)跟催補(bǔ)足及簽約

4、研討未售出戶型的原因，調(diào)整廣告媒體戰(zhàn)略

5、舉行會所及空中花園落成儀式，加大環(huán)境宣傳

6、繼續(xù)發(fā)動客戶介紹客戶

7、舉辦質(zhì)量促銷活動

20__.7.1-20__.9.30清盤期

任務(wù)：

1、清理尾盤

2、安排物業(yè)管理公司進(jìn)場

3、做好交房工作

工作重點(diǎn)：

1、開動腦會議，研究滯銷樓盤對策

2、調(diào)整媒體宣傳方式，重點(diǎn)攻擊

3、加大項(xiàng)目實(shí)景形象，公司品牌形象的宣傳力度

4、在會所內(nèi)舉辦大型社區(qū)文化活動，引導(dǎo)物業(yè)公司進(jìn)場

5、加強(qiáng)補(bǔ)足，簽約工作

6、準(zhǔn)備交房資料，確定交房具體時間

7、核準(zhǔn)項(xiàng)目實(shí)物與前期承諾是否有矛盾之處

8、做好交房工作，并加大宣傳力度，讓未買房者堅(jiān)定信心

第9篇：內(nèi)部認(rèn)購范文

【關(guān)鍵詞】 胃癌

【Abstract】 AIM: To identify and analyze a peptide binding specifically to blood vessels of human gastric cancer by phage displayed C7C peptide library in vivo and to model its three dimensional structure of the peptide by computer. METHODS: Animal models were established using subrenal capsular assay (SRCA) in immunosupressed mice implanted with human gastric cancer xenografts. The phage displayed C7C peptide library was injected intravenously into mice. After 4 rounds of selection， 14 clones were picked up randomly and sequenced inpidually. The homing ability to human umbilical vein endothelial cells (HUVEC ) of peptide CGNSNPKSC was determined by cellELISA， with SGC7901， Eca109， LoVo and HepG2 cells as control. Its three dimensional structure of peptide CGNSNPKSC was also established by computer modeling techniques. RESULTS: Fourteen clones were obtained and they displayed two kinds of peptides. The binding ability of a cyclic peptide of CGNSNPKSC toward HUVEC was higher than that of SGC7901， Eca109， HepG2 and LoVo cells. The three dimensional structure of the peptide of CGNSNPKSC was modeled successfully. CONCLUSION: The peptide of CGNSNPKSC has high binding ability to HUVEC and its stable structure and highly hydrophilic character help it form a flexible epitope of antigen. The peptide of CGNSNPKSC can be used in target therapy of tumor angiogenesis.

【Keywords】 gastric cancer; phage displayed peptide library; angiogenesis; peptides; structure modeling

【摘要】 目的: 利用噬菌體隨機(jī)環(huán)七肽庫在小鼠腎包膜下荷人胃癌模型體內(nèi)篩選能夠與人胃癌血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合的特異性分子，對其多肽進(jìn)行計(jì)算機(jī)空間結(jié)構(gòu)模擬分析. 方法：制備免疫抑制小鼠腎包膜下人胃癌移植瘤模型，用隨機(jī)環(huán)七肽庫在其體內(nèi)進(jìn)行4輪篩選，對隨機(jī)獲得的14個克隆進(jìn)行測序. 通過細(xì)胞ELISA檢測所得到的特異性小肽在臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC），SGC7901，LoVo，Eca109及HepG2細(xì)胞系上的結(jié)合能力. 并通過計(jì)算機(jī)分子模擬多肽CGNSNPKSC的空間結(jié)構(gòu). 結(jié)果：成功獲得14個噬菌體克隆，并呈現(xiàn)出2種氨基酸序列，其中多肽CGNSNPKSC，相比于對照細(xì)胞SGC7901， LoVo， Eca109， HepG2，其同HUVEC結(jié)合能力明顯增強(qiáng). 利用計(jì)算機(jī)技術(shù)成功地模擬并分析了該多肽的空間結(jié)構(gòu). 結(jié)論：多肽CGNSNPKSC同血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合能力較強(qiáng)；空間結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，是一個高親水多肽，更容易形成折曲的抗原表位，很有可能是一個極具腫瘤血管靶向治療前景的多肽.

【關(guān)鍵詞】 胃癌;噬菌體隨機(jī)肽庫;血管生成;多肽;結(jié)構(gòu)模擬

0引言

大量實(shí)驗(yàn)［1，2］證實(shí)，腫瘤生長、轉(zhuǎn)移和預(yù)后均與腫瘤血管關(guān)系密切，采用腫瘤血管抑制治療有以下幾個明顯優(yōu)勢：①血管內(nèi)皮細(xì)胞基因穩(wěn)定，不易產(chǎn)生耐藥性；②毒副作用少，可長期用藥；③一種藥物可用于多種腫瘤；④無遺傳毒性，不造成繼發(fā)惡性變，利于長期使用. 因此尋找腫瘤血管特異表達(dá)分子進(jìn)行特異性腫瘤血管治療具有十分重要的意義. 采用噬菌體隨機(jī)肽庫技術(shù)，可在欲篩選的靶標(biāo)分子結(jié)構(gòu)不明確的情況下，篩選出一些能與靶分子結(jié)合的特異性多肽［3，4］. 我們應(yīng)用噬菌體隨機(jī)肽文庫篩選技術(shù)，在荷胃癌瘤組織的免疫抑制小鼠模型體內(nèi)篩選能夠與胃癌移植瘤血管內(nèi)皮相結(jié)合的多肽，旨在為胃癌血管抑制治療提供有效的作用靶點(diǎn).

1材料和方法

1.1材料

1.1.1肽庫噬菌體隨機(jī)環(huán)七肽庫（Ph.D.-C7CTM Phage display peptide library）：購自美國New England Biolabs公司，其滴度為1.5×1013噬斑形成單位（pfu），多樣性為2.7×109 transformants，在其插入隨機(jī)七肽序列兩端各添加一個半胱氨酸（Cysteine，C），這兩個半胱氨酸形成二硫鍵，從而使隨機(jī)七肽的空間結(jié)構(gòu)相對穩(wěn)定. 宿主菌為大腸桿菌E.coli 2738. 測序引物（96g sequencing primer）序列為: 5′HOCCC TCA TAG TTA GCG TAA CG3′.

1.1.2細(xì)胞系、動物及標(biāo)本人胃腺癌細(xì)胞系SGC7901、人結(jié)腸癌細(xì)胞系LoVo、人食管癌細(xì)胞系Eca109與人肝癌細(xì)胞系HepG2均為第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院消化病研究所保存. 正常人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)按參考文獻(xiàn) ［5］自行分離培養(yǎng). BALB/c小鼠，20只，雌雄不拘，體質(zhì)量20～22 g，由第四軍醫(yī)大學(xué)動物中心提供. 標(biāo)本均來自西安交通大學(xué)第二醫(yī)院普外科胃大部切除或全胃切除，術(shù)前經(jīng)活檢，本院病理科確診為胃低分化腺癌.

1.1.3其他試劑RPMI 1640培養(yǎng)基（Gibco公司）；胎牛血清（Hyclone公司）；HUVEC培養(yǎng)液（Cell Applications公司）；抑蛋白酶肽（aprotinin）、亮抑制肽（leupeptin）、苯甲基磺酰氟（PMSF）、5′溴4‘氯3’吲哚βD半乳糖苷（Xgal）和異丙基βD硫代半乳苷（IPTG）(Sigma公司)；辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗噬菌體mAb(HRPantiM13)（Pharmacia Biotech公司）.

1.2方法

1.2.1噬菌體隨機(jī)環(huán)七肽庫的體內(nèi)篩選和測序參照文獻(xiàn)［6］制備環(huán)磷酰胺（CTX）免疫抑制小鼠腎包膜下移植瘤小鼠模型（SRCA），將手術(shù)過程中獲得的胃癌組織切割成1 mm×1 mm×2 mm大小，植入小鼠腎包膜下. 術(shù)后第6日，戊巴比妥鈉150 mg/kg腹腔注射麻醉小鼠，750 mL/L乙醇浸泡5 min后，尾靜脈內(nèi)注入1×1011 pfu的噬菌體環(huán)七肽庫，其余步驟同文獻(xiàn)［6］. 10 h后長出藍(lán)色噬斑后，隨機(jī)挑取約250個分隔良好的藍(lán)色噬斑，分別加入5 mL LB，37℃，250 r/min擴(kuò)增12 h后進(jìn)行噬菌體純化. 純化后的噬菌體經(jīng)滴定計(jì)數(shù)后，以與前次相同的滴度注射入小鼠，用于再一輪篩選，如此重復(fù)4次. 將第4輪淘篩后的噬菌體液不經(jīng)擴(kuò)增，直接感染E.coli 2738鋪到LB瓊脂糖平皿上，10 h后隨機(jī)挑取分隔良好的14個藍(lán)色噬斑，加入2 mL LB培養(yǎng)液中，37℃振搖4 h，送上海生工公司進(jìn)行測序.

1.2.2細(xì)胞培養(yǎng)及ELISA

1.2.2.1細(xì)胞培養(yǎng)SGC7901， LoVo， Eca109和HepG2細(xì)胞系均按常規(guī)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng). 取健康順產(chǎn)婦臍帶按文獻(xiàn)［5］分離HUVEC，培養(yǎng)于HUVEC培養(yǎng)液中，并經(jīng)抗人CD31 mAb染色證實(shí)分離細(xì)胞純度為90%以上. 實(shí)驗(yàn)所用的HUVEC均使用傳一代細(xì)胞.

1.2.2.2細(xì)胞ELISA檢測全部培養(yǎng)細(xì)胞接種于96孔板至終密度為1×104/孔，1 g/L戊二醛固定細(xì)胞，10 g/L BSA封閉過夜；加入1×1011 pfu的呈現(xiàn)CGNSNPKSC多肽的噬菌體，37℃孵育2 h；經(jīng)PBST重復(fù)洗滌3次，加入50 μL HRP antiM13 mAb（1∶3000），37℃孵育2 h；PBST洗滌4次后加入TMB，室溫30 min. 加入2 mol/L H2SO4終止反應(yīng)，自動ELISA儀上測A450 nm值. 以PBS作為陰性對照. 以噬菌體隨機(jī)12肽庫（PHD12）（1×1011 pfu）作為陽性對照，每個樣本選取3個復(fù)孔. 采用公式S/N=樣品平均A450 nm值/PBS組平均A450 nm值，其中S/N≥2.1作為陽性結(jié)果，而S/N

1.2.3多肽的分子模建及預(yù)測表位分析采用GROMACS 3.2軟件包，對9個多肽進(jìn)行能量最優(yōu)化與分子動力學(xué)模擬. 整個模擬過程按如下步驟進(jìn)行：運(yùn)用最陡下降法(steepest descent method)對多肽進(jìn)行2000步優(yōu)化計(jì)算，以避免做分子動力學(xué)時原子間的不合理碰撞；在多肽周圍加上1 nm厚度的水層，保證其有足夠構(gòu)象變化空間；對溶液狀態(tài)下的多肽設(shè)定pH=7；在298 K的恒定溫度下進(jìn)行20 ps的分子動力學(xué)模擬(molecular dynamical simulation，MDS)，模擬步長為1 fs，非鍵相互作用采用0.95 nm的截斷值(cut off)，MDS得到的最后構(gòu)象作為多肽在水溶液中的分析構(gòu)象. 全部工作在RedHat Linux 9.0操作系統(tǒng)，CPU為AMD2500下完成.

2結(jié)果

2.1篩選和測序4輪篩選結(jié)束后，對隨機(jī)挑選的14個噬菌體克隆進(jìn)行測序，其中的12個克隆呈現(xiàn)出CGNSNPKSC序列，2個克隆呈現(xiàn)CPHNLTKLC序列.

2.2細(xì)胞ELISACGNSNPKSC多肽對HUVEC結(jié)合能力明顯高于對SGC7901， LoVo， Eca109及HepG2細(xì)胞，接近于陽性對照噬菌體（Fig 1）.

2.3CGNSNPKSC多肽的分子結(jié)構(gòu)模擬及預(yù)測表位分析分析DMS的最終構(gòu)象，如Fig 2所示，5個分子內(nèi)氫鍵穩(wěn)定了結(jié)構(gòu)（其中二硫鍵是黃色實(shí)線，黃色虛線是分子內(nèi)氫鍵）. 2個半胱氨酸殘基形成1對二硫鍵結(jié)構(gòu)，限制了分子柔性，形成了一個α螺旋（Fig 3的白色飄帶）與一個β轉(zhuǎn)角（Fig 3的紅色飄帶）. 分析該肽的親水與疏水性，與水接觸的極性表面積為6.932 nm2(693.2平方埃)，而疏水表面積僅為3.889 nm2(388.9平方埃)，說明該9肽具有良好的親水性.

3討論

近20年的研究表明，腫瘤的發(fā)生和發(fā)展與腫瘤新生血管密切相關(guān)，尋找腫瘤血管特異性標(biāo)志物是腫瘤血管靶向治療的關(guān)鍵. 然而，由于腫瘤血管的特殊性導(dǎo)致不能有效得到特異性的腫瘤血管標(biāo)志物，如這些特異性分子只存在于腫瘤血管，在正常血管內(nèi)皮細(xì)胞中不表達(dá)或者痕量級表達(dá)［7］；分離和培養(yǎng)存在困難，至今尚未攻克；長期體外培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞也會使其喪失特性；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)多是在裸鼠體內(nèi)進(jìn)行，瘤塊的生長多是依靠腫瘤細(xì)胞自身的分裂，在一定程度內(nèi)很少依賴新生血管，血管也多為小鼠源性而非人源性. 因此，在人體內(nèi)進(jìn)行直接篩選是最佳模式，但是這樣首先會受到倫理學(xué)的挑戰(zhàn)，可行性極差［8，9］. 為了能夠模擬腫瘤在人體內(nèi)生存和生長的環(huán)境，我們利用免疫抑制小鼠制備了荷人胃癌組織移植瘤模型，并用噬菌體隨機(jī)環(huán)七肽庫對其進(jìn)行了體內(nèi)篩選，獲得兩條多肽，其中一條CGNSNPKSC多肽在14個克隆中呈現(xiàn)12次，說明該肽具有高選擇的特異性. 在不同腫瘤細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞上的結(jié)合實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了這一點(diǎn).

我們把CGNSNPKSC多肽序列輸入BLASTP中進(jìn)行檢索，雖然發(fā)現(xiàn)該序列與已知蛋白在一級結(jié)構(gòu)上沒有同源性，但不排除CGNSNPKSC多肽同某種血管內(nèi)皮相關(guān)蛋白的功能表位在空間結(jié)構(gòu)上相同或相似. 按照氨基酸的理化性質(zhì)來分析這段多肽序列，我們發(fā)現(xiàn)，除了構(gòu)成二硫鍵的2個C為疏水性氨基酸外，其余7個氨基酸均為高親水性氨基酸，這種親水多肽更容易形成折曲的抗原表位［10］. 為了能夠更好了解該段多肽的空間結(jié)構(gòu)，我們利用計(jì)算機(jī)技術(shù)對其三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行了模擬，模擬結(jié)果也證實(shí)了這個多肽的空間結(jié)構(gòu)相對穩(wěn)定，僅僅9個氨基酸就構(gòu)成了一個α螺旋以及一個β轉(zhuǎn)角，并具有較高親水性，說明該肽很有可能在空間結(jié)構(gòu)和功能上高度模擬某種血管內(nèi)皮相關(guān)蛋白，極具腫瘤血管靶向治療前景.

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